| 研究課題/領域番号 |
23249008
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| 研究種目 |
基盤研究(A)
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
松田 彰 北海道大学, 大学院・薬学研究院, 教授 (90157313)
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| キーワード | 核酸創薬 / ヌクレアーゼ抵抗性 / 2'-OMe-4'-チオリポヌクレオシド / PSMA / アンチマイクロRNA / shRNA / ホスホロチオエート結合 / ホスホジエステル結合 |
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| 研究概要 |
1)shRNAは内在性RNAから生成し、細胞質でDicerによりループ部分が切断されsiRNAとして機能する。一般にshRNAを外部投与する場合は、ベクター型で投与し、shRNAそのものとして投与する例は極めて少なく、化学修飾研究もほとんど行われていない。そこで、ヌクレアーゼ抵抗性、血中滞留性、細胞・組織標的化能を付与すべく本研究を開始した。まず、標的としてルシフェラーゼ遺伝子を選択し、ループ部分の変換、とステム部分5'末端の短鎖化を検討した。ループ部分を6mer-9merのTを用いる場合と、エチレングリコール(PEG)ループにしたshRNAs(55mer、3'末端2mer overhang)を化学合成しルシフェラーゼ強制発現HeLa細胞を用いて活性を比べたところ、PEG化すると活性の減弱が激しかった。一方、Tループ体(9merが最適)での5'末端の短鎖化では3merまで短鎖化しても活性は減弱しなかった。現在、一本鎖部分を2'-OMe体とPS(ホスホロチオエート)化しDicerでの切断および、細胞標的化を検討している。2)micro RNA (miRNA)は、ヒトの約半数以上の遺伝子発現制御に関与している。もし、それの過剰発現が問題になる場合は対応するmiRNAに対するアンチセンス分子(AMO)による二本鎖形成が効果的である。そこで、肝臓で特異的に発現し、コレステロール等の生成に関与しているmiR-122に対する完全相補的な23mer AMOのヌクレオシド部分とリン酸ジエステル部分を化学修飾し、Huh-7細胞に投与しその活性を調べた。その結果、すべてをPS化した2'-OMe-4'-チオリボヌクレオシドを持つオリゴマーが最も強力な活性を示し、24時間後よりも72時間の方がより高活性であった。現在、細胞標的化および標的化リポソームを用いるin vivo実験を行っている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
ほぼ予定通り研究が進展し、現在のところ予定の変更はしていない。
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| 今後の研究の推進方策 |
AMO-122を用いる研究が順調に進行し、来年度はin vivo実験結果を得る予定である。
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