神経芽腫で活性化したＡＬＫの下流シグナルの解析

2013 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 23300353
• 研究機関: 独立行政法人国立がん研究センター
• 研究代表者: 堺 隆一 独立行政法人国立がん研究センター, 研究所, 分野長 (40215603)
• 研究期間 (年度): 2011-04-01 – 2014-03-31
• キーワード: 神経芽腫 / ALK / リン酸化蛋白質 / 受容体チロシンキナーゼ

研究概要

神経芽腫では約1割においてALK受容体キナーゼの遺伝子変異や遺伝子増幅による活性化が見られ、その発生や進展に関わることが明らかになっている。ALK活性化の神経芽腫特異的なシグナル経路を明らかにするため、TNB-1細胞にFLAGタグ付きの野生型、F1174LおよびK1062M変異体を発現させた細胞株を樹立して、野生型及び変異型ALKに結合するチロシンリン酸化蛋白質を解析した。同定された約30の蛋白質のうちIRS1、SOS1、Grb2、ZO-1など幾つかについては、ALKとの結合がリンパ腫など他の系でも報告されており、この手法でALK結合蛋白質が確かに同定されていることが示唆された。新たにALKに結合するリン酸化蛋白質として同定したFlotillin-1（FLOT1）はその発現量の低いことが神経芽腫の予後不良と関わることから、ALKとの関わりで機能解析を進めた。その結果、ラフトに局在するFLOT1はALKと選択的に結合しエンドサイトーシスを介してALK蛋白質の分解に関わることを示した。また、神経芽腫で見られるF1174Lなど幾つかの変異に関して、変異型ALKとFLOT1との結合能が野生型に比べ著明に減少しているのが確認された。一方で神経芽腫でFLIOT1の発現をノックダウンにより抑制すると、細胞運動能、足場非依存性増殖、ヌードマウスにおける造腫瘍能などが増加するという結果も得られた。以上のことからFLOT1の発現低下やFLOT1との結合能が低いALK変異によりALK蛋白質の安定性が増すことが神経芽腫のがん化シグナルの増強に関わる可能性が示唆された。この結果は、ALK蛋白質の発現量が遺伝子変異の有無にかかわらず神経芽腫の予後不良に関わるという解析結果とも整合性が有り、今後FLOT1低値の神経芽腫においてALK阻害剤が治療に有効であるかを検証する必要がある。

現在までの達成度 (区分)

理由

25年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

25年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] Flotillin-1 regulates oncogenic signaling in neuroblastoma cells by regulating ALK membrane association (2014)
  • 著者名/発表者名: Tomiyama A, Uekita T, Kamata R, Sasaki K, Takita J, Ohira M, Nakagawara A, Kitanaka C, Mori K, Yamaguchi H, Sakai R
  • 雑誌名: Cancer Research 巻: in press ページ: in press
  • 査読あり
• [雑誌論文] Saracatinib impairs the peritoneal dissemination of diffuse-type gastric carcinoma cells resistant to Met and FGFR inhibitors. (2014)
  • 著者名/発表者名: Yamaguchi H, Takanashi M, Yoshida N, Ito Y, Kamata R, Fukami K, Yanagihara K, Sakai R.
  • 雑誌名: Cancer Sci. 巻: 105 ページ: 528-536
  • DOI: 10.1111/cas.12387
  • 査読あり
• [雑誌論文] Stromal fibroblasts mediate extracellular matrix remodeling and invasion of scirrhous gastric carcinoma cells. (2014)
  • 著者名/発表者名: Yamaguchi H, Yoshida H, Takanashi M, Ito Y, Fukami K, Yanagihara K, Yashiro M, Sakai R.
  • 雑誌名: PlosOne 巻: 9 ページ: e85485
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0085485
  • 査読あり
• [雑誌論文] Identification of integrin α3 as a molecular marker of cells undergoing epithelial-mesenchymal transition and of cancer cells with aggressive phenotypes. (2013)
  • 著者名/発表者名: Shirakihara T, Kawasaki T, Fukagawa A, Semba K, Sakai R, Miyazono K, Miyazawa K, Saitoh M.
  • 雑誌名: Cancer Sci. 巻: 103 ページ: 1189-1197
  • DOI: 10.1111/cas.12220
  • 査読あり
• [雑誌論文] Suppression of autophagy by CUB domain-containing protein 1 signaling is essential for anchorage-independent survival of lung cancer cells. (2013)
  • 著者名/発表者名: Uekita T, Fujii S, Miyazawa Y, Hashiguchi A, Abe H, Sakamoto M, Sakai R.
  • 雑誌名: Cancer Sci. 巻: 104 ページ: 865-870
  • DOI: 10.1111/cas.12154
  • 査読あり
• [雑誌論文] CDCP1 regulates the function of MT1-MMP and invadopodia-mediated invasion of cancer cells. (2013)
  • 著者名/発表者名: Miyazawa Y, Uekita T, Ito Y, Seiki M, Yamaguchi H, Sakai R.
  • 雑誌名: Mol Cancer Res. 巻: 11 ページ: 628-633
  • DOI: 10.1158/1541-7786.MCR-12-0544
  • 査読あり