研究課題
本研究では第一にATL 細胞表層の糖鎖に特異的に結合する一本鎖抗体 (scFv) を調製した。まず、ATL患者から樹立したS1T細胞の表層からO型糖鎖を切り出し、BlotGlyco 法によって捕捉、独自開発の蛍光性リンカーで糖鎖を修飾した。3つのﾌﾗｸｼｮﾝ分画し、各ﾌﾗｸｼｮﾝを、先端を金ナノ粒子で表面修飾した光ファイバーに固定化して、ファイバー型シュガーチップを調製した。このﾁｯﾌﾟを用いて、ヒトB細胞由来のナイーブ一本鎖抗体（scFv）ﾌｧｰｼﾞﾗｲﾌﾞﾗﾘからﾌｧｰｼﾞのｽｸﾘｰﾆﾝｸﾞ（バイオパニング）を行い、非ATL白血病細胞であるMOLT4 細胞に結合せず、S1T 細胞に強く結合する1クローンのscFvを得た。このscFvは、ATL細胞（MT2、 K3T、 su9T01）に高い結合性があり、非ATL細胞（HL60、 CEM、 Jurkat）では、ほとんど結合性がない、または低かったことから、ATLに優先的に結合していることが示唆された。しかし、PBMCにも結合することが分かったため、ｽｸﾘｰﾆﾝｸﾞの際にPBMC由来の糖鎖を固定化したビーズを用いたネガティブセレクションを組み入れて、さらに実験を進めている。蛍光性ナノ粒子（FNP）は、主に半導体無機材料からなる直径数ﾅﾉﾒｰﾄﾙの粒子状の物質で、紫外線の照射により強い蛍光を発する。本研究では、ATLの新規の診断ツールの開発をも目指し、FNP上にscFvを固定化したscFv固定化FNP（scFv-FNP）の開発を行い、ATL細胞に対する結合性について評価した。すなわち、scFvをNTA、ニッケル、Hisタグを介して固定化したscFv-FNP は、FACS解析と共焦点顕微鏡による蛍光観察により、再現性よく、S1T細胞に結合性を示し、非ATL細胞であるCEM細胞には結合性を示さなかった。この研究結果に基づき、より低毒性の金属で構成されたナノ粒子を用いたscFv-FNPの開発と、これらを用いたATL診断薬・ﾌﾟﾛｰﾌﾞとして応用を図る。
25年度が最終年度であるため、記入しない。
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Bioconjugate Chem
巻: 25 ページ: 286-295
10.1021/bc400425w
Monoclonal Antibodies in Immunodiagnosis and Immunotherapy
巻: 33 ページ: 42-66
Chem. Commun.
巻: 50 ページ: 3921-3923
DOI: 10.1039/c4cc00811a
Molecules
巻: 19 ページ: 2481-2496
doi:10.3390/molecules19022481
Mol. Biosyst.
巻: 9 ページ: 2988-2991
Journal of Molecular Liquids
巻: 182 ページ: 76-78
PLoS Negl Trop Dis
巻: 8 ページ: 2644
10.1371/journal.pntd.0002644
Plos One
巻: 9 ページ: 87631
10.1371/journal.pone.0087631
Recent Results Cancer Research.
巻: 193 ページ: 211-215
doi:10.1007/978-3-642-38965-8_12
J Biosci Bioeng
巻: 116 ページ: 688-696
10.1016/j.jbiosc
Org Biomol Chem
巻: 11 ページ: 5034-5041
10.1039/c3ob40899j
J Pediatr Hematol Oncol
巻: 35 ページ: 224-225
10.1097/MPH.0b013e3182830d30
Leukemia and Lymphoma.
巻: 54 ページ: 2243-2250
10.3109/10428194.2013.772174. Epub 2013 Mar 8.
