| 研究実績の概要 |
ニホンナシ自家不和合性反応を制御するSハプロタイプには雌ずい側S遺伝子S-RNaseと花粉側S遺伝子候補となる複数のF-boxタンパク質遺伝子（PpSFBB）が座乗している. 和合花粉では, PpSFBB群が分担して非自己S-RNaseを識別し, ポリユビキチン化することで, 花粉管は伸長し続けると考えられている. 本研究では, Sハプロタイプ上のPpSFBB群を網羅し, 花粉管内のS-RNaseの挙動を細胞組織レベルで解析することで, 花粉側S特異性を解明することを目的とする.
平成26年度は, S4-RNase周辺領域のBACコンティグを染色体歩行により拡張し、拡張域に3個の新規PpSFBB4を見出した. S4-RNaseの上流約544kbから下流約664kbまでに少なくとも13個のPpSFBB4がコードされることが明らかになった.
S2-RNase周辺域に座乗する12個のPpSFBB2の非翻訳配列から設計したプライマーセットを用いたRT-PCR法によりS1～S9ホモ花粉からPpSFBB2ホモログをクローニングした. このうち6個のプライマーセットを用いたPCRでは全てのホモ花粉から88%以上の高い相同性を示すホモログがクローニングされた. これらのPpSFBB2はS1～S9-RNase以外のS-RNaseを認識している可能性が示唆された.
S-RNaseと自家不和合性に関与しないnon-S-RNaseの和合･不和合花粉管への取り込み花粉管内の挙動を免疫電子顕微鏡観察した。これらRNaseは和合･不和合花粉管にエンドサイトーシスを介して取り込まれ、エンドゾームと思われる小胞に包まれ、花粉管内を移動していた. しかし, 液胞への蓄積を示す明瞭な像は得られなかった.
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