がん幹細胞を標的とするｍｉＲＮＡ含有エクソソームによる革新的がん治療法の開発

2013 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 23390087
• 研究機関: 東京医科大学
• 研究代表者: 黒田 雅彦 東京医科大学, 医学部, 教授 (80251304)
• 研究分担者: 須藤 カツ子 東京医科大学, 医学部, 兼任講師 (50126091) ; 落谷 孝広 独立行政法人国立がん研究センター, 研究所, 分野長 (60192530)
• 研究期間 (年度): 2011-04-01 – 2014-03-31
• キーワード: エクソソーム / miRNA

研究概要

(1)効率的な標的細胞へのエクソソームの導入法の確立:エクソソームに、がん特異的に結合する分子を発現させ、がん幹細胞を標的とするエクソソームの作製を検討した。昨年度に引き続きHBV由来の表面マーカーの検討を行った。さらに、がん特異抗原のスクリーニングを行った。
(2)遺伝子導入の操作を用いない特異的エクソソーム導入法の開発 :本研究項目において、エクソソーム膜表面に発現するテトラスパニンを用いることで特異的にEGFR発現細胞に、エクソソームを導入する手法を開発した。今年度は、効率的にエクソソームを単離し、テトラスパニンを導入する手法を検討した。
(3)in vivoマウス実験による抗腫瘍効果及び安全性の検討:
1.がん細胞移植モデルの検討：昨年度に引き続き各種ヒト肺がん培養細胞株、ユーイング肉腫細胞株をRAGマウスに移植したモデルを作製した。本モデルマウスを用いて293T細胞よりmiR-34a、EWS-Fli-1 siRNA含有エクソソームを作製し、全身投与系での腫瘍増殖抑制効果を判定した。
2.　Luciferaseトランスジェニックマウス（Tg）の作製とエクソソームの安全性、生体内代謝の検討：昨年度に引き続き Luciferase siRNAを含有したエクソソームを作製し、全身の各臓器における、エクソソームの発現抑制効果を検討した。また、投与後の臓器（肝、腎、肺、心、脾臓）を摘出し、組織学的にエクソソーム投与後の影響を検討した。

現在までの達成度 (区分)

理由

25年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

25年度が最終年度であるため、記入しない。

研究成果

• [雑誌論文] KLF5 regulates the integrity and oncogenicity of intestinal stem cells. (2014)
  • 著者名/発表者名: Nakaya T, Ogawa S, Manabe I, Tanaka M, Sanada M, Sato T, Taketo MM, Nakao K, Clevers H, Fukayama M, Kuroda M, Nagai R.
  • 雑誌名: Cancer Reseach 巻: Epub ahead of print ページ: in press
  • DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-13-2574
  • 査読あり
• [雑誌論文] SMAD2 MEDIATES DENDRITIC CELL SUPPRESSION BY TGF-β Smad2 is the TGF-β receptor-regulated Smad to suppress the immunogenicity of mouse and human dendritic cells. (2014)
  • 著者名/発表者名: Jeong-Hwan Yoon, Katsuko Sudo, Jin Soo Han, Min-Young Chae, Seok Hee Park, Michael Weinstein, Susumu Nakae, Tadashi Yamashita, In-Kyu Lee, Takayuki Sumida, Masahiko Kuroda, and Mizuko Mamura.
  • 雑誌名: European Journal of Immunology -2 巻: in press ページ: in press
  • DOI: Manuscript ID: eji.201242972.R1
  • 査読あり
• [雑誌論文] Activin receptor-like kinase5 inhibition suppresses mouse melanoma by ubiquitin degradation of Smad4, thereby derepressing eomesodermin in cytotoxic T lymphocytes. (2013)
  • 著者名/発表者名: Jeong-Hwan Yoon, Su Myung Jung, Seok Hee Park, Mitsuyasu Kato, Tadashi Yamashita, In-Kyu Lee, Katsuko Sudo, Susumu Nakae, Jin Soo Han, Ok-Hee Kim, Byung-Chul Oh, Takayuki Sumida, Masahiko Kuroda, Ji-Hyeon Ju, Kyeong Cheon Jung, Seong Hoe Park, Dae-Kee Kim, and Mizuko Mamura.
  • 雑誌名: EMBO molecular Medicine. 巻: 5 ページ: 1720-1739
  • DOI: 10.1002/emmm.201302524
  • 査読あり
• [雑誌論文] Development of Severe Pathology in Immunized Pregnant Mice Challenged with Lethal Malaria Parasites. (2013)
  • 著者名/発表者名: Shoichirou Mineo, Mamoru Niikura, Shin-Ichi Inoue, Masahiko Kuroda, and Fumie Kobayashi
  • 雑誌名: Infection and Immunity 巻: 81 ページ: 3865-3871
  • DOI: 10.1128/IAI.00749-13
  • 査読あり
• [雑誌論文] Estrogen and estrogen receptor induce matrix metalloproteinase (MMP)-26 expression in endometrial carcinomacells. (2013)
  • 著者名/発表者名: Nishi H, Kuroda M, Isaka K.
  • 雑誌名: Oncol Rep 巻: 30 ページ: 751-756
  • DOI: 10.3892/or.2013.2527.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Correlation between number of renal cysts and aortic circumferences measured using autopsy material. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kurata A, Inoue S, Ohno S, Nakatsubo R, Takahashi K, Ito T, Kawasaki K, Kokubo R, Sakai T, Ubukata J, Matsubara S, Muraoka R, Yamazaki J, Hirose T, Hojo M, Watanabe E, Kuroda M.
  • 雑誌名: Pathol Res Pract 巻: 209 ページ: 441-447
  • DOI: 10.1016/j.prp.2013.04.012
  • 査読あり
• [雑誌論文] Classification of secondary corneal amyloidosis and involvement of lactoferrin. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kaoru Araki-sasaki, Koji Hirano, Yasuhiro Osakabe, Masahiko Kuroda, Kazuko Kitagawa, Hiroshi Mishima, Hiroto Obata, Masakazu Yamada, Naoyuki Maeda, Kohji Nishida, Shigeru Kinoshita.
  • 雑誌名: Ophthalmology 巻: 120 ページ: 1166-1172
  • DOI: 10.1016/j.ophtha.2012.11.047
  • 査読あり
• [学会発表] 胃癌組織におけるPD-L1の発現検討. (2014)
  • 著者名/発表者名: 山田 正俊、藤田 浩司、倉田 厚、黒田 雅彦.
  • 学会等名: 第103回日本病理学会総会
  • 発表場所: 広島
  • 年月日: 20140424-20140426
• [学会発表] 自己由細胞由来のエクソソームによるドラッグデリバリーシステムへの応用. (2014)
  • 著者名/発表者名: 高梨 正勝、上田 しのぶ、須藤 カツ子、石川 章夫、黒田 雅彦
  • 学会等名: 第103回日本病理学会総会
  • 発表場所: 広島
  • 年月日: 20140424-20140426
• [学会発表] 胃癌細胞株における上皮間葉移行に関与するマイクロRNA200cとその標的の検出. (2014)
  • 著者名/発表者名: 倉田 厚、山田 正俊、橋本 浩次、藤田 浩司、大野 慎一郎、高梨 正勝、黒田 雅彦.
  • 学会等名: 第103回日本病理学会総会
  • 発表場所: 広島
  • 年月日: 20140424-20140426
• [学会発表] 肺がんを効果的に抑制するMimic microRNAの新規形状の探索. (2014)
  • 著者名/発表者名: 大野 慎一郎、板野 華蓮、原田 裕一郎、高梨 正勝、須藤 カツコ、黒田 雅彦.
  • 学会等名: 第103回日本病理学会総会
  • 発表場所: 広島
  • 年月日: 20140424-20140426
• [学会発表] Significance and applications of novel class of RNA for cancer therapy. (2014)
  • 著者名/発表者名: 黒田 雅彦
  • 学会等名: Drug Discovery World Asia 2014
  • 発表場所: Singapore
  • 年月日: 20140311-20140312
  • 招待講演
• [学会発表] ovel RNAi agent can control HCV replication. (2014)
  • 著者名/発表者名: 黒田 雅彦
  • 学会等名: RNA Silencing(A9) Keystone symposia
  • 発表場所: Seattle Washington, USA
  • 年月日: 20140131-20140205
• [学会発表] 核酸医薬品の開発 (2014)
  • 著者名/発表者名: 黒田 雅彦
  • 学会等名: 日本がん分子標的治療学会第９回トランスレーショナルリサーチワークショップ
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 20140117-20140117
  • 招待講演
• [学会発表] miRNA医薬品の開発 (2013)
  • 著者名/発表者名: 黒田 雅彦
  • 学会等名: 第６回岐阜大学先端創薬医療シンポジウム
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 20131129-20131129
  • 招待講演
• [学会発表] 疾患関連miRNAを標的にした臨床医薬品の開発 (2013)
  • 著者名/発表者名: 黒田 雅彦
  • 学会等名: 日本臓器保存生物医学会学術集会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 20131110-20131110
  • 招待講演
• [学会発表] 新規のlipid conjugate RNAを用いたがん治療法の開発． (2013)
  • 著者名/発表者名: 黒田 雅彦
  • 学会等名: 第72回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 20131005-20131005
• [学会発表] 核酸医薬品の開発のためのトランスレーショナルリサーチ. (2013)
  • 著者名/発表者名: 黒田 雅彦
  • 学会等名: 日経バイオテクオンラインプロフェッショナルセミナー
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 20130924-20130924
  • 招待講演
• [学会発表] Exosomeによるがん特異的miRNAデリバリー法の開発.
  • 著者名/発表者名: 黒田 雅彦
  • 学会等名: 第29回日本ＤＤＳ学会学術集会
  • 発表場所: 京都
  • 招待講演
• [図書] Drug Delivery System (2014)
  • 著者名/発表者名: 大野慎一郎、高梨 正勝、黒田 雅彦
  • 総ページ数: 5
  • 出版者: じほう
• [図書] 細胞工学 (2013)
  • 著者名/発表者名: 大野慎一郎、髙梨 正勝、黒田 雅彦
  • 総ページ数: 3
  • 出版者: 秀潤社