| 研究課題/領域番号 |
23390200
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| 研究機関 | 札幌医科大学 |
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研究代表者 |
篠村 恭久 札幌医科大学, 医学部, 教授 (90162619)
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| 研究分担者 |
山本 博幸 札幌医科大学, 医学部, 講師 (40332910)
鈴木 拓 札幌医科大学, 医学部, 教授 (20381254)
能正 勝彦 札幌医科大学, 医学部, 助教 (10597339)
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| 研究期間 (年度) |
2011-04-01 – 2014-03-31
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| キーワード | 胃癌 / 大腸癌 / メチル化 / マイクロRNA |
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| 研究概要 |
1. 異常メチル化の標的遺伝子として同定された新規マイクロRNAに関しては、細胞周期やアポトーシス、細胞分化に与える影響に関して機能解析を施行。また遺伝子発現ベクターを作成し、メチル化により発現が消失している腫瘍細胞株に遺伝子導入し、コロニーフォーメーションアッセイ、フローサイトメトリー、TUNNELアッセイを行う。
2. 胃癌ハイリスク群の胃炎粘膜や多発大腸癌、ポリープの背景粘膜におけるマイクロRNAの発現異常や異常メチル化について、定量的発現解析やPyrosequenceによる定量的メチル化解析を施行。発現異常や高レベルのメチル化を示すマイクロRNAをいくつか同定することができた。今後はそのような症例を追跡し、胃癌、大腸癌発生のリスクに関して検討を行う予定。
3. 炎症によって起こるメチル化の間質細胞の役割を明らかにするため、病理組織切片から、マイクロダイゼクションで得られたDNAを用いて、定量的メチル化解析を行う。
4. 胃癌および大腸癌のハイリスク群において発現異常をみとめたマイクロRNAやメチル化しているマイクロRNAの概要を同定。診断、発癌リスク予測に有用なマイクロRNAのみを搭載した、カスタムミニアレイの作成も予定している。またカスタムアレイを用いて発現やメチル化プロファイルを作成し、より多くの検体で高速にメチル化解析可能なシステムを構築する。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
1. 異常メチル化の標的遺伝子として同定された新規のマイクロRNA解析に関しては、細胞周期やアポトーシス、細胞分化に与える影響に関して機能解析をおおむね行うことができた。
2. 胃癌ハイリスク群の胃炎粘膜や多発大腸癌・ポリープの背景粘膜のマイクロRNA発現異常や異常メチル化について、定量的発現解析やPyrosequenceによる定量的メチル化解析を施行。発現異常や高レベルのメチル化を示すマイクロRNAをいくつか同定することができた。
3. 炎症によって起こるメチル化の間質細胞の役割を明らかにするため、マイクロダイゼクションで得られたDNAを用いて、定量的メチル化解析を行うことができた。
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| 今後の研究の推進方策 |
1. 遺伝子発現ベクターを作成し、異常メチル化で発現が消失している腫瘍細胞株に遺伝子導入を行い、コロニーフォーメーションアッセイ、フローサイトメトリー、TUNNELアッセイを行う予定である。
2. 胃癌ハイリスク群の胃炎粘膜や多発大腸癌、ポリープの背景粘膜におけるマイクロRNAの発現異常や異常メチル化をきたした症例を追跡し、胃癌、大腸癌発生のリスクに関して検討を行う予定。
3. また消化器癌の診断、発癌リスク予測に有用なマイクロRNAのみを搭載した、カスタムミニアレイの作成。またカスタムアレイを用いて発現やメチル化プロファイルを作成し、より多くの検体で高速にメチル化解析可能なシステムの構築も予定している。
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