研究課題
1. 心筋細胞特異的に発現するマイクロRNAの同定マイクロRNAによる心筋リプログラミング制御機構を解明するため、まず心筋細胞に特異的に発現するマイクロRNAを同定した。方法としては自ら開発した心筋細胞と心臓線維芽細胞のFACSによる高純度な細胞選別法を用いて（Ieda M, Dev Cell, 2009）、心筋特異的マイクロRNAの発現をマイクロアレイで解析する。これまでの実験の結果、既知のmiR-1,miR-133に加えて10の新規心筋特異的マイクロRNAを見出した。アレイの結果とiCM細胞におけるマイクロRNA の誘導をqRT-PCRで確認できた。2. 心筋直接リプログラミングを促進するマイクロRNAの同定新規のものも含めた 複数の心筋特異的マイクロRNAの中から心筋リプログラミングを促進するマイクロRNAを同定する。スクリーニング方法としてはa-MHC GFPマウスの心臓線維芽細胞にGata4/Mef2c/Tbx5の3因子を導入する際に、同時にマイクロRNA機能を増強するマイクロRNA mimic (miR)を導入して心筋誘導効果をαMHC-GFP、cardiac troponin T (cTnT)の心筋マーカーでFACSにより定量的に解析する。これまでの予備実験でmiRの遺伝子導入効率が90%以上であること、心筋リプログラミングを促進する心筋特異的マイクロRNA (miR-X)を同定することに成功した。今後スクリーニングを続け、他に心筋誘導を改善するマイクロRNAがないか検討する。
25年度が最終年度であるため、記入しない。
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