研究課題
高次構造を形成し、リン酸化部位に結合活性を有する人工合成したRNAアプタマーを用いて、がん細胞の放射線感受性を制御する新しい放射線増感剤の開発を目指した。DNA2本鎖切断損傷の非相同末端結合修復(NHEJ)に係わるキナーゼであるDNA-PKcsの、特に自己リン酸化部位と想定される複数のペプチド配列に対して、これに結合するRNAアプタマーをSELEX法を用いて合成を行った。SELEX法で得られたアプタマー候補配列に関して、それらをウイルスベクターシステムで細胞内に発現できるシステムの構築を行った。RNAi発現レンチウイルスベクターを用いて、RNAiの代わりにアプタマーを発現するベクターを構築した。3カ所のDNA-PKcs自己リン酸化部位(T2638、S4102、T2041)に対して、4つのアプタマー(S4102に対しては2種類を作成)ならびにランダム配列のコントロール用アプタマー発現ベクターを構築した。このベクターから、レンチウイルスをパッケージングにて作成し、アプタマーの細胞への導入システムの構築を目指した。これまでにレンチウイルスを複数回作製し、細胞への導入実験を試みたが、十分な力価をウイルスの作製には成功していない。今後、レンチウイルスの作製手順を変え、高力価のアプタマー作製を試みていく。アプタマーの細胞影響評価のために、DNA2本鎖切断損傷に集積する53BP1のフォーカスにより、DNA損傷の形成・修復を評価するシステムの構築を行ってきた。培養細胞であるU2OS由来の細胞を用いた蛍光ライブセルイメージングにより、放射線類似薬剤ネオカルシノスタチン、抗がん剤であるトポイソメラーゼ阻害剤カンプトテシンなどによる細胞周期依存的DNA2本鎖切断損傷の評価と、チェックポイント活性化による細胞周期の乱れを検出するシステムとその解析ソフトウェアの構築を行った。
26年度が最終年度であるため、記入しない。
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Cancer Med.
巻: 4 ページ: 426-436
10.1002/cam4.377.
PLoS One.
巻: 9(4) ページ: e93579
10.1371/journal.pone.0093579. eCollection 2014.