| 研究課題/領域番号 |
23390315
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 研究分野 |
外科学一般
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| 研究機関 | (独)国立成育医療研究センター |
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研究代表者 |
梨井 康 (独)国立成育医療研究センター, RI管理室, 室長 (60321890)
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| 研究分担者 |
木村 廣光 (独)国立成育医療研究センター, 共同研究管理室, 室長 (80115477)
高原 史郎 大阪大学, 大学院・医学研究科・先端移植基盤医療学, 教授 (70179547)
奥見 雅由 大阪大学, 大学院・医学研究科・泌尿器学, 助教 (60512978)
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| キーワード | 移植・再生医療 / 幹細胞 / 細胞・組織 |
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| 研究概要 |
本年度の研究は、1.iPS細胞からより簡易・大量に樹状細胞(DC)作製する方法の確立を行った:今まで確立したES、iPS細胞から樹状細胞を作成する分化誘導技術を基盤として、細胞免疫治療に用いる各種DCを簡易に大量に作製するための分化誘導方法を検討した。Step-1で7日間培養し、iPS細胞のコロニーが十分に分化したことを確かめたのち、Step-1の1枚の培養皿をトリプシン処理し、iPS細胞、OP9細胞とも単細胞にし、ゼラチンコートしたStep-1と同サイズの培養皿3枚に等量に播種し、Step-2の培養過程に入り、十分量の分化誘導された浮遊細胞を得ることができた。Step-2の速い時期で、その後の培養により、DCの能力を十分に備えた細胞を既存培養方法よりも3日ほど早く、かつ2倍ほどの大量な分化細胞を得ることができた。また、Step-3での分化誘導培養時に使用する培養皿に多くの細胞が接着し、マクロファージに分化しやすい傾向があった。この点を改良するためHydroCell培養皿に播種したところ、DCの性質に相応した培養ができ、効率的にDCを得ることができた。2.iPS細胞から制御性DC(iPS-DCreg)への分化誘導およびその機能解析を行った:iPS-DCreg細胞の誘導は、IL-10、TGF-β等様々なサイトカインの添加によって検討した。その結果、iPS-DCregでは、骨髄由来制御性DC(BM-DCreg)とほぼ同様で、Ia、CD80、CD86、CD40等表面分子の発現は通常性(Conventional)DC(DCconv)より顕著に減弱した。ギムザ染色による細胞形態の観察においてもBM-DCregとの差が見られなかった。また、卵白アルブミン(OVA、タンパク質抗原)或はデキストラン(Dextran、糖質抗原)の抗原プロセシング機能が維持されていることが確認できた。さらに、iPS-DCregは、BM-DCregと同様アロ刺激によるT細胞増殖の抑制機能がiPS-DCregの用量に比例していた。これらの結果からiPS細胞から制御性DCに分化誘導することができたといえる。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
初年度において、主に細胞免疫治療に用いる各種DCの簡易・大量に作製するための方法および制御性DCの分化誘導方法の確立等に重点を置き、これらの方法を確立したことで、今後のIn vivoでの動物モデルを用いて制御性DCの機能の検証には大いに役に立つ。
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| 今後の研究の推進方策 |
初年度で確立したiPS細胞から各種DCの簡易・大量に作製するための方法および制御性DCの分化誘導方法を生かして、他の免疫抑制細胞の分化誘導をさらに進め、これら細胞の免疫抑制機序の解明、動物移植モデルの検証による細胞療法の構築等を通じて、次世代免疫抑制細胞の本質を理解し、安全で安定した免疫抑制状態を誘導するとともに、免疫寛容を成立させる手技を開発していく予定。
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