角膜上皮細胞の細胞特性を規定するコア転写因子群の同定

2013 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 23390404
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 眼科学
• 研究機関: 京都府立医科大学
• 研究代表者: 木下 茂 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (30116024)
• 研究分担者: 上野 盛夫 京都府立医科大学, 医学研究科, 助教 (40426531) ; 川崎 諭 大阪大学, 医学研究科, 講師 (60347458)
• 研究期間 (年度): 2011-04-01 – 2014-03-31
• キーワード: 角膜上皮 / 転写因子 / ダイレクトリプログラミング / コア転写因子 / マスターレギュレーター

研究概要

本研究ではヒト角膜上皮細胞の特異的機能を維持している転写因子ネットワークについて検討を行った。マイクロアレイを用いてヒト角膜上皮細胞で高発現している転写因子を146因子選定した。さらにiPS干渉スクリーニングを用いて、ヒト角膜上皮細胞維持に関与が高い転写因子を20因子にまで絞り込んだ。その中から誘導因子を組み合わせて新生児皮膚繊維芽細胞に遺伝子導入を行ったところ、角膜上皮特異的マーカーであるケラチン３、ケラチン12を含む角膜上皮関連遺伝子の遺伝子発現の増加を認めた。このことは誘導可能であった転写因子セットがヒト角膜上皮細胞の機能を維持する転写因子ネットワークを形成している可能性を示した。

研究成果

• [雑誌論文] Involvement of cyclin D and p27 in cell proliferation mediated by ROCK inhibitors Y-27632 and Y-39983 during corneal endothelium wound healing (2014)
  • 著者名/発表者名: Okumura N, Nakano S, Kay EP, Numata R, Ota A, Sowa Y, Sakai T, Ueno M, Kinoshita S, Koizumi N
  • 雑誌名: Invest Ophthalmol Vis Sci 巻: 55(1) ページ: 318-29
  • 査読あり
• [雑誌論文] LRIG1 inhibits STAT3-dependent inflammation to maintain corneal homeostasis (2014)
  • 著者名/発表者名: Nakamura T, Hamuro J, Takaishi M, Simmons S, Maruyama K, Zaffalon A, Bentley AJ, Kawasaki S, Nagata-Takaoka M, Fullwood NJ, Itami S, Sano S, Ishii M, Barrandon Y, Kinoshita S
  • 雑誌名: J Clin Invest 巻: 124(1) ページ: 385-397
  • 査読あり
• [雑誌論文] Investigation of gene therapy using immortalized cells derived from a Gelatioous Drop-Like Dystrophy patient (2013)
  • 著者名/発表者名: Kitazawa K, Kawasaki S, Aoi K, Shinomiya K, Matsuda A, Funaki T, Nakatsukasa M, Murakami A, Kinoshita S
  • 雑誌名: Invest Ophthalmol Vis Sci 巻: 54(8) ページ: 5701-11
  • 査読あり
• [雑誌論文] Corneal endothelial cell fate is maintained by LGR5 via the regulation of hedgehog and wnt pathway (2013)
  • 著者名/発表者名: Hirata-Tominaga K, Nakamura T, Okumura N, Kawasaki S, Kay EP, Barrandon Y, Koizumi N, Kinoshita S
  • 雑誌名: Stem Cells 巻: 31(7) ページ: 1396-1407
  • 査読あり
• [雑誌論文] Corneal endothelial expansion promoted by human bone marrow mesenchymal stem cell-derived conditioned medium (2013)
  • 著者名/発表者名: Nakahara M, Okumura N, Kay EP, Hagiya図3図4 M, Imagawa K, Hosoda Y, Kinoshita S, Koizumi N
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 8(7) ページ: e69009
  • 査読あり
• [雑誌論文] 角膜の再生医療 (2013)
  • 著者名/発表者名: 上野盛夫, 中村隆宏, 木下茂
  • 雑誌名: 日本医師会雑誌 巻: 142(4) ページ: 777-780
• [雑誌論文] Visual improvement following cultivated oral mucosal epithelial transplantation (2013)
  • 著者名/発表者名: Sotozono C, Inatomi T, Nakamura T, Koizumi N, Yokoi N, Ueta M, Matsuyama K, Miyakoda K, Kaneda H, Fukushima M, Kinoshita S
  • 雑誌名: Ophthalmology 巻: 120(1) ページ: 193-200
  • 査読あり
• [雑誌論文] A novel mutation (p.Glu1389AspfsX16) of the phosphoinositide kinase, FYVE finger containing gene found in a Japanese patient with fleck corneal dystrophy (2012)
  • 著者名/発表者名: Kawasaki S, Yamasaki K, Nakagawa H, Shinomiya K, Nakatsukasa M, Nakai Y, Kinoshita S
  • 雑誌名: Mol Vis 巻: 18 ページ: 2954-60
  • 査読あり
• [雑誌論文] ROCK inhibitor converts corneal endothelial cells into a phenotype capable of regenerating in vivo endothelial tissue (2012)
  • 著者名/発表者名: Okumura N, Koizumi N, Ueno M, Sakamoto Y, Takahashi H, Tsuchiya H, Hamuro J, Kinoshita S
  • 雑誌名: Am J Pathol 巻: 181(7) ページ: 268-277
  • 査読あり
• [雑誌論文] A selective inhibitor of the Rho kinase pathway, Y-27632, and its influence on wound healing in the corneal stroma (2012)
  • 著者名/発表者名: Yamamoto M, Quantock AJ, Young RD, Okumura N, Ueno M, Sakamoto Y, Kinoshita S, Koizumi N
  • 雑誌名: Mol Vis 巻: 18 ページ: 1727-1739
  • 査読あり
• [雑誌論文] Functional role of PPARδ in corneal epithelial wound healing (2012)
  • 著者名/発表者名: Nakamura Y, Nakamura T, Tarui T, Inoue J, Kinoshita S
  • 雑誌名: Am J Pathol 巻: 180(2) ページ: 583-598
  • 査読あり
• [雑誌論文] Enhancement of corneal endothelium wound healing by a ROCK inhibitor eye drop (2011)
  • 著者名/発表者名: Okumura N, Koizumi N, Ueno M, Sakamoto Y, Takahashi H, Hirata K, Torii R, Hamuro J, Kinoshita S
  • 雑誌名: Br J Ophthalmol 巻: 95(7) ページ: 1006-1009
  • 査読あり
• [雑誌論文] Long-term results of autologous cultivated oralmucosal epithelial transplantation in the scar phase of severe ocular surface disorders (2011)
  • 著者名/発表者名: Nakamura T, Takeda K, Inatomi T, Sotozono C, Kinoshita S
  • 雑誌名: Br J Ophthalmol 巻: 95(7) ページ: 942-946
  • 査読あり
• [学会発表] Investigation of Gene Therapy and Pathophysiology Using Immortalized Cells Derived from a Gelatinous Drop-Like Dystrophy Patient (2014)
  • 著者名/発表者名: Kitazawa K, Kawasaki S, Aoi K, Shinomiya K, Matsuda A, Funaki T, Nakatsukasa M, Murakami A, Kinoshita S
  • 学会等名: Gordon Research Seminar
  • 発表場所: Ventura, USA
  • 年月日: 2014-02-16
• [学会発表] LRIG1 による角膜の恒常性維持機構の解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 中村隆宏, 羽室淳爾, 高石樹朗, 丸山和一, 永田真帆, 川崎論, 板見智, 佐野栄紀, 石井優, 木下茂
  • 学会等名: 角膜カンファランス2014
  • 発表場所: 沖縄
  • 年月日: 2014-01-31
• [学会発表] 角膜上皮細胞におけるR-spondin1 の機能解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 大倉翔貴, 中村隆宏, 畑友衣子, 小林正和, 永田真帆, 小泉範子, 木下茂
  • 学会等名: 角膜カンファランス2014
  • 発表場所: 沖縄
  • 年月日: 2014-01-31
• [学会発表] 眼表面扁平上皮腫瘍におけるLRIG1発現解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 永田真帆, 中村隆宏, 外園千恵, 稲富勉, 横井則彦, 木下茂
  • 学会等名: 角膜カンファランス2014
  • 発表場所: 沖縄
  • 年月日: 2014-01-31
• [学会発表] ヒト角膜上皮細胞シートの安定的な製造を可能にするシート作製技術の開発 (2014)
  • 著者名/発表者名: 前田謙一, 横山修一, 細田勇喜, 渡部俊介, 今川究, 中村隆宏, 木下茂
  • 学会等名: 角膜カンファランス2014
  • 発表場所: 沖縄
  • 年月日: 2014-01-30
• [学会発表] Investigation of gene therapy using immortalized cells derived from a Gelatioous Drop-Like Dystrophy patient (2013)
  • 著者名/発表者名: Kitazawa K, Kawasaki S, Aoi K, Shinomiya K, Matsuda A, Funaki T, Nakatsukasa M, Murakami A, Kinoshita S
  • 学会等名: The Association for Research in Vision and Ophthalmology, Seatle (ARVO) 2013
  • 発表場所: Seatle, USA
  • 年月日: 2013-05-08
• [学会発表] Integral Analysis of Gene Signatures and MicroRNA Expression of Cultured Human Corneal Endothelial Cells in Relation to Their Functions, Cell Senescence, Epithelial-Mesenchymal Transition, and Fibrosis (2013)
  • 著者名/発表者名: Asada K, Toda M, Hagiya M, Nakata K, Ueno M, Okumura N, Koizumi N, Hamuro J, Kinoshita S
  • 学会等名: The Association for Research in Vision and Ophthalmology 2013
  • 発表場所: Seattle, USA
  • 年月日: 2013-05-07
• [学会発表] Transfer of TACSTD2 gene into corneal epithelial cells of Gelatinous drop like corneal dystrophy and its functional expression (2013)
  • 著者名/発表者名: Matsunaga T, Kitazawa K, Yamasaki K, Sato T, Watanabe Y, Funaki T, Matsuda A, Ebihara N, Kawasaki S, Murakami A
  • 学会等名: The Association for Research in Vision and Ophthalmology, Seatle (ARVO) 2013
  • 発表場所: Seattle, USA
  • 年月日: 2013-05-07
• [学会発表] Efficacy and Safety Evaluation of Cell-Injection Therapy using Cultivated Human Corneal Endothelial Cells (2013)
  • 著者名/発表者名: Koizumi N, Okumura N, Shiina T, Suzuki S, Nakamura S, Sakamoto Y, Yamasaki K, Ueno M, Hamuro J, Kinoshita S
  • 学会等名: The Association for Research in Vision and Ophthalmology 2013
  • 発表場所: Seattle, USA
  • 年月日: 2013-05-06
• [学会発表] Rho kinase inhibitor promotes cell adhesion of corneal endothelial cells through inhibiting phosphorylation of MLC (2013)
  • 著者名/発表者名: Tsujimoto Y, Okumura N, Kay EP, Numata R, Kinoshita S, Koizumi N
  • 学会等名: The Association for Research in Vision and Ophthalmology 2013
  • 発表場所: Seattle, USA
  • 年月日: 2013-05-06
• [学会発表] A new method for the efficient and less-stress dissociation of corneal epithelial cells (2013)
  • 著者名/発表者名: Shinomiya K, Kawasahi S, Aoi K, Kitazawa K, Kinoshita S
  • 学会等名: The Association for Research in Vision and Ophthalmology, Seatle (ARVO) 2013
  • 発表場所: Seattle, USA
  • 年月日: 2013-05-05
• [学会発表] 羊膜を基質とし作成した口腔粘膜再生シートを用いた尿路再建 (2012)
  • 著者名/発表者名: 内藤泰行, 河内明宏, 邵仁晢, 中村隆宏, 稲富勉, 木下茂, 美紀恒治
  • 学会等名: 第11回日本再生医療学会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2012-06-12
• [学会発表] Establishment of immortalized corneal and conjunctival epithelial cells lacking the functional TACSTD2 gene (2012)
  • 著者名/発表者名: Kitazawa K, Kawasaki S, Shinomiya K, Matsuda A, Funaki F, Yamasaki K, Nakatsukasa M, Fukuoka H, Ebihara N, Murakami A, Kinoshita S
  • 学会等名: The Association for Research in Vision and Ophthalmology, Fort Lauderdale (ARVO) 2012
  • 発表場所: Ft. Lauderdale, USA
  • 年月日: 2012-05-07
• [学会発表] 結膜腫瘍でのLeucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains 1(LRIG1)の発現 (2012)
  • 著者名/発表者名: 永田真帆, 中村隆宏, 外園千恵, 稲富勉, 横井則彦, 板見智, 木下茂
  • 学会等名: 第116回日本眼科学会総会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2012-04-05
• [学会発表] 角膜上皮化生をきたした培養口腔粘膜上皮移植の1 例 (2012)
  • 著者名/発表者名: 張佑子, 外園千恵, 中川絋子, 中村隆宏, 稲富勉, 上田真由美, 横井則彦, 木下茂
  • 学会等名: 角膜カンファランス2012
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2012-02-23
• [学会発表] 角膜扁平上皮癌におけるGPR49 の発現の検討 (2012)
  • 著者名/発表者名: 平田香菜, 中村隆宏, 外園千恵, 稲富勉, 奥村直毅, 小泉範子, 横井則彦, 木下茂
  • 学会等名: 角膜カンファランス2012
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2012-02-23
• [学会発表] 全層角膜移植の11 年間の動向と治療成績 (2012)
  • 著者名/発表者名: 堀内稔子, 中川絋子, 稲富勉, 上田真由美, 中村隆宏, 小泉範子, 外園千恵, 横井則彦, 木下茂
  • 学会等名: 角膜カンファランス2012
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2012-02-23
• [学会発表] Cultivated Oral Mucosal Epithelial Transplantation for Ocular Surface Reconstruction in Stevens-Johnson Syndrome (2011)
  • 著者名/発表者名: Sotozono C, Inatomi T, Nakamura T, Ueta M, Yokoi N, Miyakoda K, Kinoshita S
  • 学会等名: 第115回米国眼科学会議(AAO)
  • 発表場所: Orlando, USA
  • 年月日: 2011-10-24
• [学会発表] 難治性角結膜疾患に対する自家培養口腔粘膜上皮シート移植のレトロスペクティブ調査 (2011)
  • 著者名/発表者名: 外園千恵, 稲富勉, 中村隆宏, 小泉範子, 横井則彦, 都田桂子 , 松山琴音, 木下茂
  • 学会等名: 第65回日本臨床眼科学会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2011-10-08
• [学会発表] 自家培養口腔粘膜上皮シート移植による結膜嚢再建効果の検討 (2011)
  • 著者名/発表者名: 稲富勉, 外園千恵, 中村隆宏, 小泉範子, 都田桂子, 松山琴音, 木下茂
  • 学会等名: 第65回日本臨床眼科学会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2011-10-08