ｐ５３コドン７２ＳＮＰによるｐ５３活性化挙動変化の解析

2013 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 23501267
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 土生 敏行 京都大学, 放射線生物研究センター, 助教 (70346071)
• キーワード: p53 / SNP / HPV

研究概要

SNP(single nucleotide polymorphism)は疾患への感受性や外的因子への応答に深く関わっている。SNPと外的要因による細胞影響研究の理解にはその実験系の構築が重要であると考えられる。その代表例として申請研究ではp53 SNPに着目した。ヒトp53 にはヒトだけが持つ72 残基SNP も同様にハピローマウイルス（HPV）起因の子宮頸がん発症と関連し、このSNP がp53 標的遺伝子発現誘導能に深く関わっているとされてきた。本申請研究では２３年度に相同組換えにより人工的にSNP を導入した細胞を確立し、コドン72のアルギニンを持つ大腸がん由来細胞HCT116細胞ヘテロアリルを持つ細胞及びホモ遺伝子座をもつ細胞に成功した。さらにこれらの細胞のDNA損傷に対する評価を行い、24年度に渡って行ってきた。これら細胞では、SNPの相違によりp53の標的因子の発現誘導に大きな差を示し、特に細胞周期制御に関わるp21の発現に大きな違いを観察することができた。一方p53の調節因子HMD2やその他細胞死に関与する遺伝子群ではSNPの相違による発現誘導の差は認められなかった。これはSNPによる細胞表現の決定的な因子としてp21があることになる。
さらに25年度にはHPVに対するp53応答を観察するためにHPV E6を導入したHCT116細胞を樹立し、HPVとp53 コドン72 SNPによる影響を調べるためにE6を恒常的に発現するR72 SNP　HCT116細胞とヘテロ遺伝子座でP72 SNPを持つHCT116細胞を取得した。ホモ遺伝子座でP72 SNPを持つHCT116細胞においてはE6を恒常的に発現する細胞の取得は困難で、分裂が進むにつれて生存率が低下し実験系として使用できなかった。しかしヘテロSNPを持つ細胞ではP72 SNPのみが安定で、DNA損傷時のp53機能を保証することができることを明らかにした。これらのことからp53 SNPはHPVに対する防御機構としてP72 SNPが存在していることが大いに考えられた。

研究成果

• [雑誌論文] 1. Pcf1, a large subunit of CAF-1, required for maintenance of checkpoint kinase Cds1 activity (2014)
  • 著者名/発表者名: Kunoh T and Habu T.
  • 雑誌名: Springer Plus 巻: 3:30 ページ: 1-8
  • DOI: 10.1186/2193-1801-3-30
  • 査読あり
• [雑誌論文] p31comet inactivates the chemically induced Mad2-dependent spindle assembly checkpoint and leads to resistance to anti-mitotic drugs (2013)
  • 著者名/発表者名: Habu T and Matsumoto T.
  • 雑誌名: Springer Plus 巻: 2:562 ページ: 1-15
  • DOI: 10.1186/2193-1801-2-562
• [雑誌論文] 3. The moyamoya disease susceptibility variant RNF213 1 R4810K induces genomic instability by mitotic abnormality. (2013)
  • 著者名/発表者名: Hitomi T*, Habu T*, Kobayashi H, Okuda H, Harada HK, Osafune K, Taura D, Sone M, Asaka I, Ameku T, Watanabe A, Kasahara T, Sudo T, Shiota F, Hashikata H, Takagi Y, Morito D, Miyamoto S, Nakao K, Koizumi A.
  • 雑誌名: Biochem. Biophys. Res. Commun. 巻: 439:4 ページ: 419-426
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2013.08.067
• [雑誌論文] 4. Downregulation of Securin by the variant RNF213 R4810K (rs112735431, G>A) reduces angiogenic activity of induced pluripotent stem cell-derived vascular endothelial cells from moyamoya patients. (2013)
  • 著者名/発表者名: Hitomi T*, Habu T*, Kobayashi H, Okuda H, Harada KH, Osafune K, Taura D, Sone M, Asaka I, Ameku T, Watanabe A, Kasahara T, Sudo T, Shiota F, Hashikata H, Takagi Y, Morito D, Miyamoto S, Nakao K, Koizumi A.
  • 雑誌名: Biochem. Biophys. Res. Commun. 巻: 438:1 ページ: 13-19
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2013.07.004
  • 査読あり
• [雑誌論文] An E2 enzyme Ubc11 is required for ubiquitination of Slp1/Cdc20 and spindle checkpoint silencing in fission yeast. (2013)
  • 著者名/発表者名: Horikoshi Y, Habu T, Matsumoto T.
  • 雑誌名: Cell Cycle 巻: 12:6 ページ: 961-971
  • DOI: 10.4161/cc.23946
  • 査読あり
• [学会発表] Mysterin遺伝子のR4810K多型はもやもや病特異的iPS細胞由来血管内皮細胞においてSecurinの発現抑制を介して血管形成能を低下させる (2014)
  • 著者名/発表者名: 小林果、人見敏明、土生敏行、原田浩二、小泉昭夫
  • 学会等名: 第13回 分子予防環境医学研究会
  • 発表場所: 和歌山県民文化会館
  • 年月日: 20140131-20140201
• [学会発表] もやもや病感受性変異体Mysterin R4810Kは有糸分裂異常によりゲノム不安定性を誘導する (2014)
  • 著者名/発表者名: 人見敏明、小林果、土生敏行、原田浩二、小泉昭夫
  • 学会等名: 第13回 分子予防環境医学研究会
  • 発表場所: 和歌山県民文化会館
  • 年月日: 20140131-20140201