研究課題
更年期障害女性に対するエストロゲン補充療法の代表薬プレマリンの長期服用で、乳がん、卵巣がんおよび子宮内膜がんなどの発がん頻度が上昇する。プレマリンは妊娠馬の尿から製造されるため、天然エストロゲン以外にB環不飽和型エストロゲン（エクインエストロゲン）を含有する。エクインエストロゲンは生体内で代謝活性化され高突然変異性の4-OHEN-DNA付加体を形成するが、検出系が未整備であるため、同付加体の発がんへの役割に関する研究が進んでいない。そこで、我々は4-OHEN-DNA付加体特異モノクローナル抗体を新規開発し、10<8>塩基中5個の4-OHEN-DNA付加体を定量できる実験系(ELISA)を確立した。 本研究では、ヒト乳がん細胞(MCF-7)において、活性型エクインエストロゲンである4-OHENおよび4-OHEQを処理した後、4-OHEN-DNA付加体の修復動態を検討した。その結果、いずれの場合も、24時間以内に全く修復されないことを発見した。この難修復性が単なる細胞毒性の結果ではないことを証明するため、薬剤低濃度処理実験を可能とする10倍高感度付加体検出系の確立を目指したが、化学発光や蛍光の使用など様々な条件を検討したにもかかわらず満足な結果は得られなかった。そこで、同程度の細胞毒性を示す紫外線線量照射後のシクロブタン型二量体と(6-4)型光産物の修復動態、および活性型アセチルアミノフルオレン(AAF)処理後のAAF-DNA付加体の修復動態についてELISAで検討した結果、3種類の損傷ともヌクレオチド除去修復による有意な修復が観察された。それ故、難修復性は4-OHEN-DNA付加体に特有の現象であることが示唆された。現在、難修復性の機序は、ヒストン蛋白が4-OHEN付加体DNAと強く結合するため、修復蛋白が付加体に接近できないとする仮説の下、検証実験を進めている。
3: やや遅れている
4-OHEN-DNA付加体の難修復性が単なる細胞毒性の結果ではないことを証明するため、毒性を生じない低濃度4-OHEN処理実験が必要と考えた。そのため、4-OHEN-DNA付加体の検出感度を10倍高める条件を探したが、成功しなかったため。
難修復性の機序について、ヒストン蛋白が4-OHEN付加体DNAと強く結合するため、修復蛋白が付加体に接近できないとする仮説を検証する。続いて、活性型エクインエストロゲンである4-OHENと受容体の複合体が特定DNA配列に結合し、4-OHEN-DNA付加体のホットスポットを形成しないか検討する。
該当せず
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Mol. Cell
巻: 43 ページ: 788-797
