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本研究は，足場として３本鎖DNAを利用し，３本のランダム配列ペプチドを連結したコンビナトリアル合成レセプターライブラリーの開発を目的とした。方法としては，３本鎖を形成する各１本鎖DNAの一方の端にアミノ酸を付加し，もう一方の端にそのアミノ酸に対応したDNAタグを付加する。これにより，標的分子に対して複数個所で結合することにより高い選択性・親和性を有し，付加するアミノ酸の同定が可能なライブラリーを構築する。
前年度までに，相補鎖を加えて2本鎖とした後，T4 DNA ligaseによりDNAタグを連結できることを確認したので，今年度は実際にTrp，Phe，Valの３種類のアミノ酸を用いたジペプチドライブラリーの作成を試みた。また，ライブラリーの有効性を示すための比較対象として，通常のペプチドライブラリーを用いたセレクションも行った。ライブラリーの作成は，まずFmoc-Trp/Phe/Val-OSuを5'アミノ化DNAに連結し，脱保護したのち相補鎖を加えて2本鎖として，各アミノ酸に対応するDNAタグを連結した。次にタグ配列を連結したDNAをStreptavidin Magnetic Beadsに結合させ，BanII処理によりタグ結合断片をDNAをビーズから回収した。それぞれのアミノ酸を付加したDNAを混合したのち三分割し，２番目のアミノ酸の付加を行った。さらに各アミノ酸に対応するDNAタグを連結し，Beadsに結合させた後，0.15 M NaOHにより１本鎖DNAを解離させた。各１本鎖DNAを混合し３本鎖の形成を試みたが，その確認には至っていない。現在３本鎖形成条件の検討を行っており，ライブラリーが作成できれば，これを用いてセレクションを行う予定である。本研究は，アミノ酸に対するDNAタグ付加を簡便に行う方法を開発し，有意義な成果が得られたと考えている。
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