研究概要 |
本年度は、ショウジョウバエ由来の転写因子由来のGAGA亜鉛フィンガー(GAGA zf)およびヒト転写因子由来のSp1亜鉛フィンガー(Sp1 zf)を用いて引き続き金属置換およびレドックス挙動について検討を行った。各Zfの亜鉛イオン結合部位であるフィンガードメイン部分は30残基で構成されており、その部分はペプチド固相合成法(Fmoc法)を用いて化学合成し、逆相HPLCにより精製し、完全なアポ体を得ることに成功した。また、今回GAGAについては亜鉛配位部位のヒスチジン残基の部分を非天然のアミノ酸であるぴピリジン環を有するアミノ酸(Ala-Py)に置換してそれらの金属結合についても検討を行った。用いた金属イオンとしては、Zn(II),Co(II),Ni(II),Cu(II),Fe(II)の五種類を用いて行った。その結果、GAGAの野生型ではCu(II),Fe(II)を除く金属イオンで二次構造の誘起が認められた。一方、3位に位置にN原子を有する3ピリジル基(Ala-3Py)においては、Fe(II)のみ二次構造を誘起することを新たに見出した。現在、各種金属イオンとペプチドとの結合定数をITCおよびCD、UV滴定から求めている。 また、GAGAのZn(II),Co(II),Ni(II)については分子進化的手法の一つであるSystematic Evolution of Ligand by Exponential enrichment法(SELEX法)を用いて各金属置換体のDNA結合配列の配列の選択性、許容性について検討を行った。その結果、いずれの金属置換体も最終的にはある特定のDNA配列に収束することが明らかとなった。ただし、その収束速度は各金属イオンによって異なっていた。また、興味深いことに選択されてきた配列がショウジョウバエのゲノム上にある遺伝子配列であることが分かった。
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