| 研究概要 |
植物の細胞壁は主にセルロースと各種の多糖（ペクチン、ヘミセルロース）ならびにアラビノガラクタン-プロテイン（AGP）と呼ばれる糖タンパク質で構成される。本研究ではAGPの糖鎖に着目し、糖鎖を特異的に分解する酵素の探索、酵素遺伝子のクローニング、酵素によるAGP糖鎖の断片化と構造解析、得られたオリゴ糖の生理機能解析を目指した。申請者達はAGP糖鎖の特異的分解酵素（特定の糖鎖配列を認識して分解する酵素）として、既にエキソ-β-1,3-ガラクタナーゼとエンド-β-1,6-ガラクタナーゼを見出している。
平成23年度はエンド-β-1,3-ガラクタナーゼの探索を行い、エノキタケ培養液から各種クロマトグラフィーで酵素を精製した。精製酵素のＮ末端アミノ酸配列を調べ、その配列をもとにcDNAを単離した。酵素の基質特異性などの性質を調べ、その成果を発表した（Kotake et al., Journal of Biological Chemistry, 286巻, 2011年）。
平成24年度はAGP糖鎖の特異的分解酵素として、今までに知られていないAGP分解酵素活性を探索した。平成25年度も継続したが良好な結果は得られていない。ケンブリッジ大学のDupree教授と共同で、今までに見出した各種AGP分解酵素を用いてアラビドプシス葉のAGPの断片化とその構造解析を行った。得られたオリゴ糖の構造を調べAGP糖鎖の構造モデルを構築した(Tryfona et al., Plant Physiology, 160巻, 2012年）。
平成25年度はダイコン成根AGPの糖鎖構造解析を行い、L-アラビノースが多様な結合でAGP糖鎖を構築していることを明らかにした（Shimoda et al., Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry, in press）。
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