| 研究概要 |
基本転写因子は、RNAポリメラーゼIIを転写開始領域に正しく位置づかせ、最終的にメッセンジャーRNAを合成可能な状態に活性化するまでの一連の過程を担う大変重要なタンパク質である。現在、RNAポリメラーゼIIと基本転写因子から構成される生体超分子複合体（転写開始装置）の立体構造モデル化が世界中で進められている。
基本転写因子の一員であるTFIIEは、天然変性領域を広く含む等の問題によりうまく結晶化できずX線結晶構造解析の見通しは全く立っていない。そこで本研究は、溶液中の立体構造を決定することができるNMR法を用いて全長構造の解明を目指す。TFIIEは(αβ)異種二量体で分子量が約８万４千のため解析が大変困難であるが、得られる成果は転写開始装置の構造モデル化を通し、立体構造に基づいた転写開始機構の解明に多大に貢献することが期待される。
大腸菌の共発現系から調製した13C, 15N標識、および2H(100%), 13C, 15N標識全長TFIIEαβ複合体を用いて、種々の多次元NOESY実験を実施した。得られたスペクトルを解析し、水素原子間距離情報を収集した。また、重水素交換実験から水素結合情報を得た。さらに、帰属した化学シフトから主鎖二面角を見積もった。これらを制限情報とし、Xplor-NIHプログラムを用いてシミュレーティッド・アニーリング法により立体構造を計算を行し初期構造を得た。併行して、立体整列同位体標識（SAIL）法の導入を進め、大量調製法を確立した。
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