研究概要 |
高等生物における細胞増殖の根幹は、親細胞からの遺伝情報を正確に倍化し娘細胞に等しく分配することであり、その一連のプロセスは厳密に制御されている。申請者は、真核生物広範に分布しているセリン・スレオニンキナーゼの一つ「CK2 (CKII, casein kinase 2) alpha タンパク」について、翻訳開始因子eIF5を特定の細胞周期(G1初期)に直接リン酸化することで細胞周期進行に関与することをすでに報告した(Homma, MK. et al, PNAS, 2005)。さらにCK2の広範な分布や活性調節の仕組み等から、増殖への具体的な作用点にヒストンタンパク合成制御が予想された。本研究は、CK2がヒストン遺伝子発現の誘導、タンパク合成制御とともに、機能的なヌクレオソーム形成に関与する機序について解析する事を目的とする。 現在までに、コアヒストンならびにリンカーヒストン遺伝子について、細胞周期進行の時系列に沿った発現定量解析がセットアップできた。現在、遺伝子発現レベルの解析と併せタンパク定量解析、ヌクレオソーム形成について以下のようにすすめている。CK2が関与するシグナル伝達系や、CK2のターゲット分子であるeIF5の関与、ならびにCK2活性制御シグナルと関連させ、各種遺伝子変異体発現細胞、各種刺激財や阻害剤添加等、様々な条件下でのデータ収集を行っている。さらに生化学的な機能解析の観点から、抗CK2抗体による免疫沈降法ならびに抗tag pull-down法により、キナーゼと相互作用する複合体を様々な細胞条件下で調製し、プロテオミクス技術を用いた解析を繰り返し行っている。 それら再現性を確認した結果をふまえ、ヒストンタンパク合成の誘導と終結、ヒストン2量体・4量体の形成と交換反応、ヌクレオソーム形成、等への関与についてより包括的な理解が得られるよう、解析を進めている。
|