| 研究課題/領域番号 |
23570216
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| 研究機関 | 安田女子大学 |
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研究代表者 |
井上 幸江 安田女子大学, 薬学部, 教授 (60159978)
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| 研究分担者 |
赤木 玲子 安田女子大学, 薬学部, 教授 (50150967)
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| 研究期間 (年度) |
2011-04-28 – 2014-03-31
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| キーワード | 転写制御 / ストレス応答 / 熱ショック転写因子 / ヘムオキシゲナーゼ |
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| 研究概要 |
「目的」本研究では、様々なストレスに応答して誘導されるヘムオキシゲナーゼ１（ＨＯ－１）の転写制御に、熱ショック転写因子（ＨＳＦ）がどのように関与しているかを明らかにすることによって、複雑な発現調節機構を有するＨＯ－１の生体防御機構における生理機能を明らかにすることを目的とする。「成果」１）野生型ＭＥＦとＨＳＦ１欠損ＭＥＦを用い、ヘムによるＨＯ－１の誘導合成をウエスタンブロット法により解析したところ、ＨＯ－１の発現はＨＳＦ１欠損細胞の方が増強していた。このことは、ＨＳＦ１はヘムによるＨＯ－１の誘導合成に抑制的に働くことを示唆する。２）同様のＭＥＦを用い、温熱刺激を与えたのちにヘムを添加し、ＨＯ－１の誘導合成を見たところ、ＨＳＦ１欠損細胞では、温熱刺激によりＨＯ－１の発現が著しく抑制されていた。このことは、熱ショックにより誘導される未知の転写因子が、ＨＯ－1の発現を抑制するが、その抑制をＨＳＦ１が解除することを示唆する。３）１）２）の結果をもとに、野生型ＭＥＦとＨＳＦ１欠損ＭＥＦを用いＤＮＡチップ解析を行った。その結果、small Maf転写因子群が温熱刺激とヘム添加により5倍以上増加していた。small Maf転写因子群はダイマー形成により抑制性転写因子として作用することが知られている。「重要性」熱ショック転写因子が酸化ストレスの防御に働くＨＯ－１の転写制御に深く関与していることが示され、生体防御機構の解明に新しい知見を得ることができた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
ストレスタンパク質ヘムオキシゲナーゼ（ＨＯ－１）の熱ショック転写因子（ＨＳＦ）による発現制御の解明とＨＯ－１の生体防御における生理機能の解明が目的である。 Ｈ２３年度の研究から、ＨＳＦ１がヘムによるＨＯ－１の発現誘導に、ストレスの違いによって正と負の両方の制御に関与していることが示された。また、ＨＯ－１の発現制御に、新たに別の転写因子small Mafが関与していることが示唆された。
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| 今後の研究の推進方策 |
１）ＤＮＡチップ解析でえられた転写因子群の発現変動を、刺激条件や時間経過を変えてＲＴ－ＰＣＲで確認する。その結果をもとに、転写因子の変動をタンパク質レベルで確認する。２）ＨＳＦ１と相互作用をもつ転写因子を免疫共沈降法により同定する。候補としては、ＤＮＡチップ解析でえられた転写因子群および、ＨＯ－１の転写制御に関与していると報告されているＮｒｆ２やＢａｃｈ１。３）Ｈｓｐ７０と相互作用をもつ転写因子を免共沈降法により同定する。候補としては、ＤＮＡチップ解析でえられた転写因子群および、ＨＯ－１の転写制御に関与していると報告されているＮｒｆ２やＢａｃｈ１。４）siRNAを利用して、ＨＳＦ１やＨｓｐ７０の発現を抑制し、ＨＳＦ１欠損細胞でみられた現象の再現性を検討する。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
１）リアルタイムＲＴ－ＰＣＲに必要な試薬類・・・ＨＯ－１の発現制御に関与する転写因子遺伝子群の発現変化を解析する。２）抗体類・・・ウエスタンブロット法によるタンパク質の同定や免疫共沈降法によるタンパク質の相互作用を解析する。３）siRNAによる発現抑制実験に必要な試薬類４）細胞培養関連試薬（ウシ胎仔血清等）５）細胞培養やその他の実験に必要なプラスチック製品６）その他、生化学用試薬
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