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2014 年度 実績報告書

Wntシグナルを介したフロアープレートによる脊椎分節機構の解析

研究課題

研究課題/領域番号 23570251
研究機関東京工業大学

研究代表者

猪早 敬二  東京工業大学, 生命理工学研究科, 助教 (70302958)

研究期間 (年度) 2011-04-28 – 2015-03-31
キーワード発生・分化 / メダカ / 骨形成 / 脊椎発生 / 分節性 / Wnt
研究実績の概要

fu-2は脊椎骨が融合し、脊椎の分節性が失われる自然発生突然変異体である。fu-2の原因遺伝子を同定するためにポジショナルクローニングを行ったところ、fu-2の原因遺伝子は染色体の23番に位置していることが判明した。さらに詳細なゲノムマッピングを行った結果、原因遺伝子があると予想される領域は染色体23番の末端であり、メダカゲノムデータベース上に存在しない未知の領域であることが分かった。また、この未知の領域にマップされる複数のDNAマーカーを用いてBACクローンライブラリーのスクリーニングを行ったところ、2種類のBACクローンを単離することができた。次に、これら2種類のBACクローンの全塩基配列の決定を行い、得られた塩基配列の情報を基に、メダカensembleデータベースを再検索したところ、染色体23番末端結合部の物理地図の更新を行うことができた。更新された物理地図によると未知結合領域は1Mbp以上にのぼることが明らかとなった。さらに、これらの未結合ゲノム断片に含まれる遺伝子を調べたところ、Wntシグナル経路に関与する遺伝子が2種類存在することが分かったが、これらの遺伝子の予想翻訳領域において変異箇所は見られなかった。そこで当該年度では、上記の2種類のBACクローンを用いたトランスジェニクレスキュー個体を作製することを試みた。fu-2変異体にインジェクションするBACクローンには、クリスタリンプロモーター制御下でEGFPが眼で発現するレポーター遺伝子を組み込むことで、トランスジェニック個体の判定を容易にする工夫をした。しかしながら現在のところ、トランスジェニックレスキュー系統の開発には至ってはいない。また、TALENやCRISPRによるゲノム編集技術を用いて、上記の2種類の原因候補遺伝子の変異体を現在作製しているところである。

  • 研究成果

    (1件)

すべて 2014

すべて 学会発表 (1件)

  • [学会発表] 脊椎の分節パターニングに異常を示すメダカ変異体の解析2014

    • 著者名/発表者名
      福島慶子
    • 学会等名
      第37回日本分子生物学会
    • 発表場所
      パシフィコ横浜
    • 年月日
      2014-11-25 – 2014-11-27

URL: 

公開日: 2016-06-01  

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