| 研究課題/領域番号 |
23580413
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| 研究機関 | 麻布大学 |
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研究代表者 |
滝沢 達也 麻布大学, 獣医学部, 教授 (00247305)
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| 研究分担者 |
田中 和明 麻布大学, 獣医学部, 准教授 (50345873)
森田 英利 麻布大学, 獣医学部, 教授 (70257294)
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| キーワード | ラット / 胎盤 / 一酸化窒素 |
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| 研究概要 |
代表者らは胎盤における一酸化窒素（NO）産生をスピントラップ・電子常磁性共鳴吸収(EPR)法により解析し、同時にNO合成酵素(NOS)の発現調節を検討してきた。生体におけるNO産生の解析が困難なこともあり、胎盤におけるNO産生の調節とその役割については不明な点が残されている。本年度は、ラット胎盤におけるNO産生の役割を検討する一環として、血管内皮細胞増殖因子（VEGF）発現に及ぼすNOの影響を検討し、さらにタンパク質のS-ニトロシル化が関与しているか検討した。NOS阻害剤NG-nitro-L-arginine-methyl ester（L-NAME）を妊娠15日のラットに持続注入し、スピントラップ・EPR法によりNO産生量を経時的に解析した。L-NAMEの持続注入により、NO産生量は対照群より約85％減少していた。さらに、VEGF 発現はNOS阻害6時間後には有意に減少したが、24時間後には回復していた。一方、低酸素誘導因子(HIF)-1αと誘導型NOSの発現は24時間後には有意に増加した。また、胎盤組織におけるタンパク質のS-ニトロシル化と核内移行、核分画と細胞質分画から抽出したタンパク質量に変化が観察され、検討中である。
胎盤組織片培養においてリポ多糖（LPS）でiNOS発現を誘導すると、VEGF発現は増加傾向を示した。さらに、LPSと L -NAMEの併用によりVEGF発現は有意に減少したことから、in vitroにおいてもNOがVEGF発現を促進していることが示された。以上の結果は、in vivoとin vitroにおいてNOがVEGF発現を誘導し、ラット胎盤におけるこの時期のNO産生はHIF-1を介したNOとVEGFの相互作用により維持されていることが示唆された。また、その際タンパク質のS-ニトロシル化が関与している可能性が示唆された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
交付申請書に記載した平成24年度の研究計画のうち、実験動物を用いた研究実施計画は順調に進み、また、培養系での実験が順調に進み、一定の成果を得ている。一方、S-ニトロシル化タンパク質の検出は予備的に実施できているものの、その後の進展が少なく停滞気味であることから、全体としては概ね順調な研究達成度と判断した。
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| 今後の研究の推進方策 |
昨年度までの研究成果によりラット胎盤におけるNO産生とNOS発現とその作用の一端は把握できたので、今年度は、これまでの予備的成果に基づいて、タンパク質のS-ニトロシル化について検討する。
妊娠ラットから胎盤を採取し、ビオチンスイッチ法を用いて、候補タンパク質のS-ニトロシル化を検出し、定量的な評価を試みる。また、胎盤組織において、S-ニトロシル化されたタンパク質の量的変動を観察する。さらに、培養細胞あるいは、胎盤の組織片培養法により、低酸素培養下での検討も含めて、NO産生時に関与していることが予想されるタンパク質についてS-ニトロシル化を検討する。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
昨年度から繰り越された研究経費は小額であるので、今年度の研究経費と合わせて、当初の目的通り、主に物品費を対象として研究経費を充当していく予定である。
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