研究課題
近年，申請者は，がん抑制遺伝子である p53 が E2F1 への結合を介して Myeloid elf-1 like factor (MEF) の発現を転写レベルで抑制することを見出した（Taura M, Suico MA, et al., Nucl Acids Res. 2010）．本研究では，MEF の発現制御機構の全容解明を究極の目的とし，p53 による MEF の翻訳後発現制御機構の解明を行なった．その結果，p53陽性細胞に比べ，p53 欠損細胞におけるMEFの発現量は上昇していたことから，p53は，MEFの蛋白質発現量を負に制御する因子であることが明らかになった．一方，p53によるMEF蛋白質の発現抑制には，MEF蛋白質の安定性の変化が関与していることがCHXチェイス実験で明らかになり，p53は，MEF蛋白質発現のみならずその機能をも抑制することを見いだした．また，p53によるMEFの発現抑制は，プロテアソーム阻害剤であるMG-132により阻害されたことから，p53は，MEF蛋白質のプロテアソーム分解を促進することが明らかになった．最後に，p53が影響を与えるプロテアソーム分解制御因子であるE3リガーゼのスクリーニングを行い，p53は，MDM2の発現レベルを転写依存的に亢進し，その結果として，MEFの発現量を減少させるというユニークなメカニズムが存在することが明らかになった．
2: おおむね順調に進展している
平成23年度は，がん抑制遺伝子 p53 による MEF の翻訳後制御機構の解明を中心に検討する予定であり，最終的に，p53がプロテアソーム分解制御因子であるE3リガーゼのMDM2の発現レベルを転写依存的に亢進し，その結果として，MEFの発現量を減少させるというユニークなメカニズムが存在することが明らかになり，当初の計画通りに計画が進行した．
がん抑制遺伝子 p53 による MEF の翻訳後制御機構の解明が当初予定通りに進行したが，未だに不明な点もある．そこで，平成24年度以降は，さらに，MDM2とMEFの関係性に着目し，より詳細なデータ解析を行う．具体的には，(1) MDM2がMEFの安定性に影響を与えるか否か，(2) MDM2とMEFの相互作用部位を，mutagenesis法やマンマリアンツーハイブリッドシステムを用いた解析により同定，(3) MEFの分解が引き起こされる局在の同定（核内か細胞質か？），(4) MDM2以外のE3リガーゼの関与の詳細検討，を実施する．また，当初予定であったがん抑制遺伝子 pRb による MEF の制御機構の解明に関する基礎検討も可能であれば実施する．
本研究で実施する実験のほとんどは，細胞培養系を用いた遺伝子導入実験，リポーターアッセイ，RT-PCR，免疫沈降法である．これらの実験には，伝子導入試薬：Mirus社LT1（１本約3万円）．レポーターアッセイ：Promega社のDual luciferase assay Kit（1000回分１0万円）． RT-PCR：SYBR Green Kit（１反応1000円）．抗体（１本約3-5万円）などを用いる予定である，また，本研究領域は，非常に進展が早いため，その情報収集を目的として，に本願学会およびアメリカ細胞生物学会に参加することで，研究の動向をさぐる．さらに，平成24年度は論文投稿を目標とする．
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巻: - ページ: 印刷中
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http://molmed730.org/
