| 研究概要 |
本申請課題では、ヒトがんウイルスEpstein-Barr virus/EBVに対する新規分子標的薬の開発を目指している。具体的には、DNAに結合するピロールイミダゾールポリアミド化合物に着目し、EBV発がんに重要なEBNA1蛋白質のDNA結合を抑制する抗EBNA1阻害剤の開発を目的とする。本年度は、OriP DNA配列に結合してEBNA1の機能を阻害する化合物の開発を目指し、OriP 上のEBNA1結合塩基配列に特異性高く結合するピロールイミダゾールポリアミド化合物のデザインと合成実験を行った。まず、OriP上のDS領域の４カ所のDNA配列 site 1～4に対するポリアミド化合物DSE1,2,3,4を実際に合成、精製した。また、本化合物を用いてのin vitro EMSA用に大腸菌組換え蛋白質、GST-EBNAを大量精製した。この組換え蛋白質を用いたGST-EBNA1とoriP DNAとのin vitro binding EMSA assayの実験系を最適化した。その過程で、GST-EBNA1があまり高濃度に存在すると、それにより塩基配列特異的な結合よりも、GST-EBNA1の非特異的なDNA結合が生じてしまうことが判明した。そのためより選択的な実験条件を検討したところ、反応液に少量のデタージェントを加味することで、より塩基配列特異的なDNA結合が安定して見られるようになった。この実験条件で、ポリアミド化合物とoriP DNAの結合を検討した結果、マイクロモルオーダーでのポリアミド化合物とoriP DNAとの結合が確認された。さらにEMSAアッセイにより、その条件では一つのポリアミド化合物に、EBNA1-DNA結合の阻害活性が認められた。今後さらに解析していく予定である。
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