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本研究課題では、ヒトがんウイルスEpstein-Barr virus/EBVに対する新規分子標的薬の開発を目指している。具体的には、DNAに結合するピロールイミダゾールポリアミド化合物に着目し、EBV発がんに重要なEBNA1蛋白質のDNA結合を抑制する抗EBNA1阻害剤の開発を目的とする。
本年度は、OriP DNA配列に結合してEBNA1の機能を阻害する化合物の開発を目指し、その結果、マイクロモルオーダーでのポリアミド化合物とoriP DNAとの結合が確認された。さらにEMSAアッセイにより、その条件では一つのポリアミド化合物に、EBNA1-DNA結合の阻害活性が認められた。
EBNA1のDNA結合に対する阻害活性が見いだされた化合物については、その標的となるDNA塩基配列を確定させるために、in vitroのFootprinting assayを行い、確かに目的の標的配列に結合している事が判明した。類似の構造のポリアミドでも検討したところ、標的となる塩基配列はそれぞれ予想通りEBNA1が結合するであろうと思われる配列であったが、その結合力に違いがあることが明らかになった。数種のポリアミドの標的DNAの結合力は、EBNA2とDNAの結合を阻害する活性の強さと相関が見られた事から、これらのポリアミドは、競合阻害によりEBNA1とDNAの結合を抑制していることが推測される。また、EBNA1の結合サイトではあるが、塩基配列が少々異なるsite 1~4についてもEBNA1-DNA結合に対するポリアミドの阻害能力も検定したところ、理論的に100%マッチする塩基配列をもつオリゴDNAに対する阻害効果が最も強かった事から、DNAとポリアミドの結合力が、その阻害効果に極めて需要であることが示唆された。
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