未知のポリＡＤＰ－リボシル化タンパク質の同定、修飾部位決定と生物学的意義の解明

2013 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 23590350
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 医化学一般
• 研究機関: 長浜バイオ大学
• 研究代表者: 三輪 正直 長浜バイオ大学, バイオサイエンス学部, 教授 (20012750)
• 研究期間 (年度): 2011 – 2013
• キーワード: 翻訳後修飾 / ポリADP-リボシル化 / ショウジョウバエ変異体 / アクセプタータンパク質

研究概要

ポリADP-リボシル化の生物学的な意義は、DNA修復以外にはまだ不明な点が多い。特にin vivoにおけるポリADP-リボシル化のアクセプター蛋白質の同定から機能を調べることとした。この目的にポリ(ADP-リボース）の分解酵素のノックアウト・ショウジョウバエを用いた。この変異体は、温度条件により羽化できるが神経変性症状を示し神経疾患のモデルともいえる。ポリ(ADP-リボース）抗体のアフィニティーカラム、アルカリ処理、２次元電気泳動法と質量分析を組み合わせて、ポリADP-リボシル化のアクセプター蛋白質候補を検索し、alcohol dehydrogenaseを含む複数の蛋白質を同定した。

研究成果

• [雑誌論文] Mitochondrial P5, a member of protein disulphide isomerase family, suppresses oxidative stress-induced cell death (2012)
  • 著者名/発表者名: Shitara, Y., Tonohora, Y., Goto, T., Yamada, Y., Miki, T., Makino, H., Miwa, M., Komiya, T.
  • 雑誌名: J Biochem 巻: 152(1) ページ: 73-85
  • DOI: 10.1093/jb/mvs034
  • 査読あり
• [雑誌論文] A novel pathway of centrosome amplification that does not require DNA lesions (2012)
  • 著者名/発表者名: Tsuda, M., Tanaka, M., Mushiake, M., Takahashi, J., Tanaka, K., Watase, J., Fujisawa, J.-I., Miwa, M.
  • 雑誌名: Cancer Sci 巻: 103(2) ページ: 191-196
  • DOI: 10.1111/j.1349-7006.2011.02152.x.Epub2011Dec15
  • 査読あり
• [雑誌論文] Ink4a and Arf are crucial factors in the determination of the cell of origin and the therapeutic sensitivity of Myc-induced mouse lymphoid tumor (2012)
  • 著者名/発表者名: Sugihara, E., Shimizu, T., Kojima, K., Onishi, N., Kai, K., Ishizawa, J., Nagata, K., Hashimoto, N., Honda, H., Kanno, M., Miwa, M., Okada, S., Andreeff, M., Saya, H.
  • 雑誌名: Oncogene 巻: 31(23)[Epub ahead of print] ページ: 2849-2861
  • DOI: 10.1038/onc.2011.462
  • 査読あり
• [雑誌論文] Approaches to separate and identify polyADP-ribosylated proteins using PARG knockout Drosophila (2011)
  • 著者名/発表者名: Nodono, H., Hamada, A., Kuroda, Y., Kamemura, K., Hasegawa, M., Komiya, T., Kondo, C., Che, F. S., Hanai, S., Miwa, M.
  • 雑誌名: Methods Mol Biol 巻: 780 ページ: 377-390
  • DOI: 10.1007/978-1-61779-270-0_22
  • 査読あり
• [雑誌論文] PARP proteins, NAD, epigenetics, and antioxidative response in abiotic stress. In : Applied plant genomics and biotechnology
  • 著者名/発表者名: Poltronieri, P., Miwa, M.
  • 雑誌名: Woodhead Publishing, Elsevier, Cambridge, UK(Eds. Palmiro Poltronieri and Yiguo Hong (Invited article)) 巻: (In press)
• [学会発表] Regulation of in vivo level of polyADP-ribosylation, cell growth and centrosome amplification (2014)
  • 著者名/発表者名: Tanaka, M., Ida, C., Takahashi, J., Eguchi, T., Ohta, N., Yamashita, S., Tsukada, M., Mushiake, M., Fujii, T., Ikegami, S., Nishi, Y., Fujisawa, J., Miwa, M.
  • 学会等名: Cold Spring Harbor Laboratory Meeting on The PARP Family & Friends : Gene regulation & beyond
  • 発表場所: Cold Spring Harbor Laboratory, New York
  • 年月日: 20140409-12
• [学会発表] ヒト白血病細胞K562の細胞分化誘導過程における細胞内NAD量およびポリ(ADP-リボース)量の変動 (2013)
  • 著者名/発表者名: 井田智恵利, 緒方進, 塚田匡輝, 田中正和, 三輪正直
  • 学会等名: 第36回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 神戸国際展示場(P2-0477)
  • 年月日: 20131203-06
• [学会発表] 組み替えhuman poly(ADP-ribose) polymerase 1の精製と予備的構造解析 (2013)
  • 著者名/発表者名: 香山賢一, 江口貴之, 森田寛之, 亀村和生, 西義介, 三輪正直, 白井剛
  • 学会等名: 第51回日本生物物理学会年会
  • 発表場所: 国立京都国際会館
  • 年月日: 20131028-30
• [学会発表] Detection of DNA strand Breaks with ELISA for poly(ADP-ribose) (2013)
  • 著者名/発表者名: Tsukada, M., Eguchi, T., Yamashita, S., Takahashi, J., Tanaka, M., Fujii, T., Ikegami, S., Miwa, M.
  • 学会等名: PARP2013 19^<th> International Conference on ADP-ribosylation
  • 発表場所: Centre de Recherche du Centre Hospitalier Universitaire de Quebec-Pavillon CHUL, Quebec city, Canada
  • 年月日: 20130906-09
• [学会発表] Effect of inhibition of polyADP-ribosylation on cell proliferation in CHO-K1 cells (2013)
  • 著者名/発表者名: Tanaka, M., Takahashi, J., Eguchi, T., Tsukada, M., Mushiake, M., Fujisawa, J-I., Miwa, M.
  • 学会等名: PARP2013 19^<th> International Conference on ADP-ribosylation
  • 発表場所: Centre de Recherche du Centre Hospitalier Universitaire de Quebec-Pavillon CHUL, Quebec city, Canada
  • 年月日: 20130906-09
• [学会発表] ポリADP-リボ-ス分解酵素(PARG)ノックアウトショジョウバエから同定されたalcohol dehydrogenase (ADH)のポリADP-リボシル化の検証 (2012)
  • 著者名/発表者名: 山下幸子, 江口貴之, 藤井貴弘, 亀村和生, 小宮徹, 蔡晃植, 田中正和, 藤澤順一, 西義介, 三輪正直
  • 学会等名: 第35回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 福岡国際会議場・マリンメッセ福岡
  • 年月日: 20121211-14
• [学会発表] 組み替えhuman poly(ADP-ribose) polymerase 1の精製とその立体構造解析 (2012)
  • 著者名/発表者名: 香山賢一, 江口貴之, 森田寛之, 亀村和生, 西義介, 三輪正直, 白井剛
  • 学会等名: 第35回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 福岡国際会議場・マリンメッセ福岡
  • 年月日: 20121211-14
• [学会発表] 生理的条件におけるDNA損傷の程度を測るためのポリ(ADP-リボ-ス)量の測定 (2012)
  • 著者名/発表者名: 江口貴之, 高橋淳, 貴田亨, 藤井貴弘, 池上晋, 三輪正直
  • 学会等名: 第35回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 福岡国際会議場・マリンメッセ福岡
  • 年月日: 20121211-14
• [学会発表] 種々の条件下におけるヒト細胞のポリ(ADP-リボ-ス)量の変化 (2012)
  • 著者名/発表者名: 太田成美, 江口貴之, 高橋淳, 田中正和, 藤井貴弘, 池上晋, 三輪正直
  • 学会等名: 第35回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 福岡国際会議場・マリンメッセ福岡
  • 年月日: 20121211-14
• [学会発表] ELISA法を用いた細胞内ポリ(ADP-リボ-ス)の定量 (2012)
  • 著者名/発表者名: 江口貴之, 三輪正直, 他
  • 学会等名: 第31回分子病理学会(恵那シンポジウム)
  • 発表場所: 恵那峡グランドホテル
  • 年月日: 20120721-22
• [学会発表] ポリ(ADP-リボ-ス)分解酵素(PARG)ノックアウトショウジョウバエに蓄積するタンパク質のポリADP-リボシル化の検証 (2012)
  • 著者名/発表者名: 山下幸子, 三輪正直, 他
  • 学会等名: 第31回分子病理学会(恵那シンポジウム)
  • 発表場所: 恵那峡グランドホテル
  • 年月日: 20120721-22
• [学会発表] Preparation of quantities of recombinant human poly(ADP-ribose) polymerase 1 for structural analysis (2011)
  • 著者名/発表者名: Koyama, K., Eguchi, T., Morita, H., Sakai, T., Kamemura, K., Nishi, Y., Miwa, M.
  • 学会等名: 第34回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: パシフィコ横浜(2P-0310)
  • 年月日: 20111213-16
• [学会発表] ポリADP-リボシル化の阻害と中心体増幅の関係 (2011)
  • 著者名/発表者名: 寺田佳優, 虫明正敏, 高橋淳, 藤井貴弘, 田中正和, 三輪正直
  • 学会等名: 第34回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: パシフィコ横浜(3P-0487)
  • 年月日: 20111213-16
• [学会発表] Change of the amount of poly(ADP-ribose) in cells under physiological Condition and DNA damage (2011)
  • 著者名/発表者名: Eguchi, T., Takahashi, J., Kida, T., Fujii, T., Ikegami, S., Miwa, M.
  • 学会等名: 第34回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: パシフィコ横浜
  • 年月日: 20111213-16
• [学会発表] Effect of inhibition of polyADP-ribosylation on cell proliferation (2011)
  • 著者名/発表者名: Takahashi, J., Mushiake, M., Tsuda, M., Tanaka, M., Miwa, M.
  • 学会等名: 第34回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: パシフィコ横浜(4P-0430)
  • 年月日: 20111213-16
• [学会発表] Verification of an acceptor protein for polyADP-ribosylation from poly(ADP-ribose) glycohydrolase-knockout Drosophila melanogaster (2011)
  • 著者名/発表者名: Yamashita, S., Eguchi, T., Nodono, H., Hamada, A., Kuroda, Y., Kamemura, K., Komiya, T., Hanai, S., Miwa, M.
  • 学会等名: 第34回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: パシフィコ横浜
  • 年月日: 20111213-16
• [学会発表] Effect of inhibition of polyADP-ribosylation on centrosome and chromosome (2011)
  • 著者名/発表者名: 三輪正直, 虫明正敏, 高橋淳, 江口貴之, 家村顕自, 大杉美穂, 藤沢順一, 田中正和
  • 学会等名: 第70回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: 名古屋会議センター
  • 年月日: 20111003-05
• [学会発表] ポリ(ADP-リボース)分解酵素遺伝子欠失変異による神経細胞死を呈するショウジョウバエのポリADP-リボシル化タンパク質の同定法について (2011)
  • 著者名/発表者名: 三輪正直, 野殿弘人, 浜田彰子, 黒田泰仁, 亀村和生, 長谷川慎, 小宮徹, 近藤真千子, 藤井貴弘, 蔡晃植, 花井修二
  • 学会等名: 第84回日本生化学会大会
  • 発表場所: 国立京都国際会館(シンポジウム1S4a-5)
  • 年月日: 20110921-24
• [学会発表] Poly(ADP-ribose)polymerase-1による転写因子FOXO1の機能調節と細胞増殖の制御, シンポジウム (2011)
  • 著者名/発表者名: 坂巻純一, 大徳浩照, 吉用賢治, 三輪正直, 深水昭吉
  • 学会等名: 第84回日本生化学会大会
  • 発表場所: 国立京都国際会館(シンポジウム1S4a-6)
  • 年月日: 20110921-24
• [学会発表] ミトコンドリア局在型P5安定発現細胞におけるH2O2誘導性細胞死とエネルギー代謝 (2011)
  • 著者名/発表者名: 設楽優, 後藤貴宏, 三輪正直, 小宮徹
  • 学会等名: 第84回日本生化学会大会
  • 発表場所: 国立京都国際会館
  • 年月日: 20110921-24
• [学会発表] General method to quantify poly(ADP-ribose) and to isolate polyADP-ribosylated proteins in vivo (2011)
  • 著者名/発表者名: Miwa, M., Eguchi, T., Nodono, H., Hamada, A., Yamashita, S., Fujii, T., Kamemura, K., Komiya, T., Hasegawa, M., Che, F-S., Ikegami, S.
  • 学会等名: FASEB Summer Research Conference : NAD Metabolism & Signaling
  • 発表場所: Lucca, Italy
  • 年月日: 20110904-09
• [学会発表] DNA損傷を必要としない新しい中心体増幅経路 (2011)
  • 著者名/発表者名: 三輪正直
  • 学会等名: 第3回中心体研究会
  • 発表場所: 東京理科大学, 東京
  • 年月日: 2011-12-17
• [学会発表] DNA損傷を起こさない化合物による中心体増幅経路の存在 (2011)
  • 著者名/発表者名: 田中正和, 津田雅貴, 高橋淳, 塚田匡輝, 虫明正敏, 山田真生, 藤澤順一, 三輪正直
  • 学会等名: 第58回日本生化学会近畿支部例会
  • 発表場所: 関西医科大学, 大阪
  • 年月日: 2011-05-21