ヘルパー依存型アデノウイルスベクター発現効率向上と細胞特異性付加に向けた改良

2013 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 23590377
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 人類遺伝学
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 鐘ケ江 裕美 東京大学, 医科学研究所, 助教 (80251453)
• 連携研究者: 斎藤 泉 東京大学, 医科学研究所, 教授 (70158913)
• 研究期間 (年度): 2011 – 2013
• キーワード: 遺伝子治療 / アデノウイルスベクター / 細胞特異性

研究概要

ヘルパーウイルス依存型アデノウイルスベクター(HD-AdV)は、発現効率がE1置換型ベクターよりも劣っていた。本研究では、有用性の高いstufferの同定と目的遺伝子発現効率を上昇するウイルスDNA領域の同定に成功した。この領域は特定の蛋白質をコードせず、エンハンサー活性も持たないことを明らかにした。
また、ゲノムから切り出した細胞特異的プロモーターを組み合わせた「細胞特異的発現HD-AdV」として、THプロモーターからCreを発現するスイッチユニットとCre依存的にGFPを発現する「標的ユニット」を併せ持つベクターの構築に成功し、ドーパミン神経細胞特異的にGFPが発現することを確認した。

研究成果

• [雑誌論文] Efficient production of adenovirus vector lacking genes of virus-associated RNAs that disturb celluar RNAi machinery (2013)
  • 著者名/発表者名: Maekawa A, Pei Z, Suzuki M, Fukuda H, Ono Y, Kondo S, Saito I, Kanegae Y
  • 雑誌名: Scientific Reports 巻: 3 ページ: 1136
• [雑誌論文] Adenovius vectors lacking virus-associated RNA expression enhance shRNA atctivity to suppress hepatitis C virus replication (2013)
  • 著者名/発表者名: Pei Z, Shi G, Kondo S, Ito M, Maekawa A, Suzuki M, Saito I, Suzuki T, Kanegae Y
  • 雑誌名: Scientific Rep. 巻: 3 ページ: 3575
• [雑誌論文] Trans-complemented hepatitis C virus particles as a versatile tool for study of virus assembly and infection (2012)
  • 著者名/発表者名: Suzuki R, Saito K, Kato T, Shirakura M, Akazawa D, Ishii K, Aizaki H, Kanegae Y, Matsuura Y, Saito I, Wakita T, Suzuki T
  • 雑誌名: Virology 巻: 432 ページ: 29-38
• [雑誌論文] Influence of loxP insertion upstream of the cis-acting packaging domain on adenovirus packaging efficiency (2012)
  • 著者名/発表者名: Kanegae Y, Ishimura M, Kondo S, Saito I
  • 雑誌名: Microbiol Immunol ページ: 447-455
• [雑誌論文] Copy number of adenoviral vector genome transduced into target cells can be measured using quantitative PCR : Application to vector titration (2012)
  • 著者名/発表者名: Pei, Z, Kondo S, Kanegae Y, Saito, I
  • 雑誌名: BBRC 巻: 417 ページ: 945-950
• [雑誌論文] Conditional gene expression in hepatitis C virus transgenic mice without induction if severe liver injury using a non-inflammatory Cre-expressing adenovirus (2011)
  • 著者名/発表者名: Chiyo T, Sekiguchi S, Hayashi M, Tobita Y, Kanegae Y, Saito I, Kohara M
  • 雑誌名: Virus Res 巻: 160 ページ: 89-97
• [雑誌論文] Comparison of efficiency between FLPe and Cre for recombinase-mediated cassette exchange (RMCE) in vitro and in adenovirus vector production (2011)
  • 著者名/発表者名: Takata Y. Kondo S, Goda N, Kanegae Y, Saito I
  • 雑誌名: Genes Cells 巻: 16 ページ: 765-777
• [雑誌論文] High-level expression by tissue/cancer-specific promoter with strict specificity using a single adenoviral vector (2011)
  • 著者名/発表者名: Kanegae Y, Terashima M, Kondo S, Fukuda H, Maekawa A, Pei Z, Saito I
  • 雑誌名: Nucleic Acids Res 巻: 39 ページ: e7
• [雑誌論文] Keratinocyte growth factor gene transduction ameliorates pulmonary fibrosis induced by bleomycin inmice (2011)
  • 著者名/発表者名: Sakamoto S, Yazawa T, Baba Y, Sato H, Kanegae Y, Hirai T, Saito I, Goto T, Kurahashi K
  • 雑誌名: Am. J. Respir. Cell Molec. Biol ページ: 489-497
• [雑誌論文] BavA-mediated adherence is a potentiator of the Helicobacter pylori type IV secretion systemactivity (2011)
  • 著者名/発表者名: Ishijima N, Suzuki M, Acida H, Ichikawa Y, Kanegae Y, Saito I, Boren T, Haas R, Sasakawa Cand Mimuro H
  • 雑誌名: J. Biol. Chem ページ: 25256-25264
• [学会発表] 宿主RNAi経路に影響を与えるvirus-associated RNAを欠失したアデノウイルスベクターの高効率作製法 (2013)
  • 著者名/発表者名: 近藤小貴, 前川文, 裴崢, 鈴木まりこ, 斎藤泉, 鐘ヶ江裕美
  • 学会等名: 第19回日本遺伝子治療学会学術集会
  • 発表場所: 岡山
  • 年月日: 20130000
• [学会発表] Therapeutic strategy of HBV using VA-deleted adenovirus vectors dually expressing shRNA and interferon (2013)
  • 著者名/発表者名: Pei Z, Maekawa A, Suzuki M, Kanegae Y, Kondo S, Saito I
  • 学会等名: 2013 International Meeting on Molecular Biology of Hepatitis B viruses
  • 発表場所: Fudan University, Shanghai
  • 年月日: 20130000
• [学会発表] Dual-safe adenovirus vector lacking virus-associated RNA genes enhanced shRNA activity (2013)
  • 著者名/発表者名: Kanegae Y, Maekawa A, Pei Z, Suzuki M, Kondo S, Saito I
  • 学会等名: The 21th European Society of Gene and Cell Therapy collaborative Congress
  • 発表場所: Madrid
  • 年月日: 20130000
• [学会発表] First-generation adenovirus vector expresses viral-associated (VA) RNAs that disturb cellular gene expressions (2013)
  • 著者名/発表者名: Kondo S, Maekawa A, Suzuki M, Kanegae Y, Saito I
  • 学会等名: The 21th European Society of Gene and Cell Therapy collaborative Congress
  • 発表場所: Madrid
  • 年月日: 20130000
• [学会発表] Very efficient production of adenovirus vector lacking genes of virus-associated RNAs that disturb cellular RNAi machinery : safer alternative to current vector (2013)
  • 著者名/発表者名: Maekawa A, Pei Z, Suzuki M, Kondo S, Saito I
  • 学会等名: The European Society of Gene and Cell Therapy 2013 Annual Meeting, Palacio Municipal de Congresos
  • 発表場所: Madrid
  • 年月日: 20130000
• [学会発表] アデノウイルスベクターから常に発現しているvirus-associated (VA) RNAは標的細胞内の遺伝子発現に影響を与える (2013)
  • 著者名/発表者名: 近藤小貴, 前川文, 鈴木まりこ, 鐘ヶ江裕美
  • 学会等名: 第61回日本ウイルス学会学術集会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 20130000
• [学会発表] アデノウイルスベクターの目的遺伝子挿入領域と向きはベクター作製や発現効率に影響を与えるか:Dual発現vector作製に向けた検討 (2013)
  • 著者名/発表者名: 鈴木まりこ, 前川文, 近藤小貴, 鐘ヶ江裕美
  • 学会等名: 第61回日本ウイルス学会学術集会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 20130000
• [学会発表] アデノウイルスベクターの問題点:ベクターがコードするVirus-associated (VA) RNAは宿主遺伝子発現に影響を与える (2013)
  • 著者名/発表者名: 近藤小貴, 前川文, 裴崢, 鈴木まりこ, 鐘ヶ江裕美, 斎藤泉
  • 学会等名: 第36回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 20130000
• [学会発表] 細胞特異的長期発現持続型mini-adenovirus vector (mini-AdV)の開発 (2013)
  • 著者名/発表者名: 前川文, 裴崢, 鈴木まりこ, 吉岡貴史, 近藤小貴, 鐘ヶ江裕美, 斎藤泉
  • 学会等名: 第36回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 20130000
• [学会発表] E3領域への目的遺伝子の挿入はアデノウイルスベクターの作製効率に影響を与えるか:ベクター/目的遺伝子キメラmRNAの生成 (2013)
  • 著者名/発表者名: 鈴木まりこ, 近藤小貴, 鐘ヶ江裕美, 斎藤泉
  • 学会等名: 第36回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 20130000
• [学会発表] 高力価VA RNAs欠失アデノウイルスベクター新規作製法の開発 (2012)
  • 著者名/発表者名: 前川文, 裴崢, 近藤小貴, 鐘ヶ江裕美, 斎藤泉
  • 学会等名: 第60回日本ウイルス学会学術総会
  • 発表場所: 大阪
  • 年月日: 20120000
• [学会発表] VA RNA欠失型アデノウイルスベクターを用いたC型肝炎治療法の開発 (2012)
  • 著者名/発表者名: 裴崢, 史国利, 近藤小貴, 伊藤昌彦, 鐘ヶ江裕美, 鈴木哲朗, 斎藤泉
  • 学会等名: 第60回日本ウイルス学会学術総会
  • 発表場所: 大阪
  • 年月日: 20120000
• [学会発表] 第一世代アデノウイルスベクターにおける異なる目的遺伝子挿入部位による発現効率の比較検討 (2012)
  • 著者名/発表者名: 鈴木まりこ, 前川文, 近藤小貴, 鐘ヶ江裕美, 斎藤泉
  • 学会等名: 第35回日本分子生物学会
  • 発表場所: 福岡
  • 年月日: 20120000
• [学会発表] 高力価VA RNAs欠失アデノウイルスベクター新規作製法の開発 (2012)
  • 著者名/発表者名: 前川文, 裴崢, 鈴木まりこ, 近藤小貴, 鐘ヶ江裕美, 斎藤泉
  • 学会等名: 第35回日本分子生物学会
  • 発表場所: 福岡
  • 年月日: 20120000
• [学会発表] アデノウイルスベクターから発現するVA RNAがshRNAに影響を与えるか (2012)
  • 著者名/発表者名: 裴崢, 史国利, 近藤小貴, 伊藤昌彦, 鈴木哲朗, 斎藤泉, 鐘ヶ江裕美
  • 学会等名: 第35回日本分子生物学会
  • 発表場所: 福岡
  • 年月日: 20120000
• [図書] 実はもっと簡単で使いやすいアデノウイルスベクター(実験医学, 第32巻) (2014)
  • 著者名/発表者名: 近藤小貴, 裴崢, 斎藤泉, 鐘ヶ江裕美
  • 総ページ数: 103-108
  • 出版者: 羊土社
• [図書] アデノウイルスベクターの最近の進展:VA欠失ベクターを中心に(第63巻) (2013)
  • 著者名/発表者名: 近藤小貴, 前川文, 斎藤泉, 鐘ヶ江裕美
  • 総ページ数: 155-164
  • 出版者: 日本ウイルス学会
• [産業財産権] VA遺伝子破壊アデノウイルスベクターおよびそれを調製するための前駆体ベクター (2012)
  • 発明者名: 鐘ヶ江 裕美, 斎藤 泉
  • 権利者名: 鐘ヶ江 裕美, 斎藤 泉
  • 産業財産権種類: 特許
  • 産業財産権番号: 特願2012-213069
  • 出願年月日: 2012-09-26
  • 外国