食道扁平上皮癌における細胞極性制御因子ＰＡＲ－３遺伝子欠失の機能解析

2011 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 23590470
• 研究機関: 京都府立医科大学
• 研究代表者: 安居 幸一郎 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (30323695)
• 研究期間 (年度): 2011-04-28 – 2014-03-31
• キーワード: PAR-3 / 食道扁平上皮癌 / タイトジャンクション / 欠失 / ZO-1

研究概要

食道扁平上皮癌はわが国において頻度が高く、かつ難治性の癌である。その治療成績を向上させるためには、食道扁平上皮癌の発生・進展に関与する特異的な分子病態を明らかにし、治療標的分子を同定することが重要である。　DNA コピー数異常は発癌メカニズムのひとつである。食道扁平上皮癌に生じたDNA コピー数異常を高密度オリゴヌクレオチドアレイで網羅的に解析した結果、Partition-defective 3 (PAR-3)遺伝子のホモ欠失と発現消失を初めて発見した。ホモ欠失は癌抑制遺伝子のマーカーのひとつである。PAR-3は細胞間タイトジャンクションと細胞極性の形成に必須の分子である。細胞極性と細胞間接着の消失は進行癌に共通して観察される現象であり、周囲への浸潤や転移に密接に関連する。PAR-3 欠失が食道扁平上皮癌におけるタイトジャンクションの形成異常および浸潤・転移・増殖に関わる機能的役割、さらにその臨床病理学的意義を解明することが本研究の目的である。　本年度は、 PAR-3 遺伝子がホモ欠失し、発現が消失していることを発見した食道扁平上皮癌細胞株（KYSE30 とKYSE270）とPAR-3の発現が保持されている細胞株とを比較して、PAR-3とタイトジャンクションのマーカーであるZO-1の細胞内局在を蛍光二重染色で調べた。その結果、PAR-3の発現が保持されている細胞では細胞間接着面にPAR-3とZO-1が共局在している（タイトジャンクションが形成されている）のに対し、PAR-3の発現が消失している KYSE30 細胞とKYSE270細胞ではZO-1 が細胞間接着面から消失している（タイトジャンクションが消失している）ことを明らかにした。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

PAR-3 遺伝子がホモ欠失し、発現が消失していることと発見した食道扁平上皮癌（KYSE30 とKYSE270）でPAR-3とZO-1の細胞内局在を蛍光二重染色で検討し、KYSE30 細胞とKYSE270細胞ではPAR-3の欠失に伴ってタイトジャンクションが消失していることを明らかにできた。当初の計画通り順調に研究が進展している。

今後の研究の推進方策

平成23年度に得られた結果を基にして、PAR-3遺伝子のホ乳類細胞内発現ベクターの作製と、siRNAによるノックダウンの実験系を構築する。PAR-3遺伝子ホモ欠失細胞にPAR-3遺伝子を発現ベクターで強制発現した時、あるいは逆にPAR-3 の発現を siRNAでノックダウンした時の(1)タイトジャンクション形成、(2)細胞の浸潤・転移・増殖能への影響を調べる。

次年度の研究費の使用計画

PAR-3遺伝子発現ベクターの作製とsiRNAの作製、細胞培養、PCRやWestern blot、蛍光免疫染色などに必要な試薬を購入する。また、学会旅費、論文作成費、文具と書籍購入費等にも研究費を使用する予定である。

研究成果

• [雑誌論文] Japan Study Group of Nonalcoholic Fatty Liver Disease (JSG-NAFLD). A simple clinical scoring system using ferritin, fasting insulin, and type IV collagen 7S for predicting steatohepatitis in nonalcoholic fatty liver disease (2011)
  • 著者名/発表者名: Sumida Y, Yoneda M, Hyogo H, Yamaguchi K, Ono M, Fujii H, Eguchi Y, Suzuki Y, Imai S, Kanemasa K, Fujita K, Chayama K, Yasui K, Saibara T, Kawada N, Fujimoto K, Kohgo Y, Okanoue T
  • 雑誌名: J Gastroenterol 巻: 46 ページ: 257-268
  • DOI: 10.1007/s00535-010-0305-6
• [雑誌論文] High expression of p300 in HCC predicts shortened overall survival in association with enhanced epithelial mesenchymal transition of HCC cells. (2011)
  • 著者名/発表者名: Yokomizo C, Yamaguchi K, Itoh Y, Nishimura T, Umemura A, Minami M, Yasui K, Mitsuyoshi H, Fujii H, Tochiki N, Nakajima T, Okanoue T, Yoshikawa T.
  • 雑誌名: Cancer Lett 巻: 310 ページ: 140-147
  • DOI: 10.1016/j.canlet.2011.06.030
  • 査読あり
• [雑誌論文] Oxidative stress is closely associated with tumor angiogenesis of hepatocellular carcinoma. (2011)
  • 著者名/発表者名: Jo M, Nishikawa T, Nakajima T, Okada Y, Yamaguchi K, Mitsuyoshi H, Yasui K, Minami M, Iwai M, Kagawa K, Itoh Y, Yoshikawa T.
  • 雑誌名: J Gastroenterol 巻: 46 ページ: 809-821
  • DOI: 10.1007/s00535-011-0392-z
  • 査読あり
• [雑誌論文] Simple formula to predict response to peginterferon alpha2b and ribavirin combination therapy in genotype 1 chronic hepatitis C patients with high viral loads. (2011)
  • 著者名/発表者名: Itoh Y, Nishimura T, Hashimoto H, Yamaguchi K, Niimi T, Yokomizo C, Fujii H, Minami M, Yasui K, Mitsuyoshi H, Okanoue T, Takehara T, Hiasa Y, Onji M, Yoshikawa T.
  • 雑誌名: Hepatol Res 巻: 41 ページ: 126-132
  • DOI: 10.1111/j.1872-034X.2010.00750.x
  • 査読あり
• [雑誌論文] Impact of amino acid substitutions in hepatitis C virus genotype 1b core region on liver steatosis and glucose tolerance in non-cirrhotic patients without overt diabetes. (2011)
  • 著者名/発表者名: Sumida Y, Kanemasa K, Hara T, Inada Y, Sakai K, Imai S, Yoshida N, Yasui K, Itoh Y, Okanoue T, Yoshikawa T.
  • 雑誌名: J Gastroenterol Hepatol 巻: 26 ページ: 836-842
  • DOI: 10.1111/j.1440-1746.2010.06568.x
  • 査読あり
• [雑誌論文] Characteristics of patients with nonalcoholic steatohepatitis who develop hepatocellular carcinoma. (2011)
  • 著者名/発表者名: Yasui K, Hashimoto E, Komorizono Y, Koike K, Arii S, Imai Y, Shima T, Kanbara Y, Saibara T, Mori T, Kawata S, Uto H, Takami S, Sumida Y, Takamura T, Kawanaka M, Okanoue T.
  • 雑誌名: Clin Gastroenterol Hepatol 巻: 9 ページ: 428-433
  • DOI: 10.1016/j.cgh.2011.01.023
  • 査読あり
• [雑誌論文] Nonalcoholic fatty liver disease and nonalcoholic steatohepatitis in Japan. (2011)
  • 著者名/発表者名: Okanoue T, Umemura A, Yasui K, Itoh Y.
  • 雑誌名: J Gastroenterol Hepatol 巻: 26 ページ: 153-162
  • DOI: 10.1111/j.1440-1746.2010.06547.x
  • 査読あり
• [学会発表] 肝細胞癌におけるtranscriptional cofactor P300の役割 (2011)
  • 著者名/発表者名: 横溝千尋、山口寛二、西村健、光吉博則、安居幸一郎、南祐仁、岩井眞樹、伊藤義人、吉川敏一
  • 学会等名: 第47回日本肝臓学会総会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2011年6月2日
• [学会発表] ソラフェニブによる抗腫瘍効果の検討 (2011)
  • 著者名/発表者名: 片山貴之、安居幸一郎、横溝千尋、西村健、遠藤美生、岡田頼久、山口寛二、光吉博則、南祐仁、岩井眞樹、伊藤義人、吉川敏一
  • 学会等名: 第47回日本肝臓学会総会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2011年6月2日
• [学会発表] 肝細胞癌に対するソラフェニブ治療の実態と有効性・安全性の検討―多施設共同研究― (2011)
  • 著者名/発表者名: 片山貴之、安居幸一郎、角田圭雄、城正泰、木村浩之、高見史郎、新美敏久、藤井秀樹、中村英樹、世古口悟、益澤明、藤井恒太ら
  • 学会等名: 第47回日本肝臓学会総会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2011年6月2日
• [学会発表] SOX2は食道扁平上皮癌においてPI3K/Akt経路の活性化を介して、腫瘍形成を促進する (2011)
  • 著者名/発表者名: 玄泰行、安居幸一郎、山田展久、和田貴子、内藤裕二、谷脇雅史、吉川敏一
  • 学会等名: 第70回日本癌学会総会
  • 発表場所: 名古屋
  • 年月日: 2011年10月3日
• [備考]
  • URL: http://www.f.kpu-m.ac.jp/k/sun/