トキソプラズマ原虫に特異的なＧＴＰーＰＫの基質供給経路の解明

2013 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 23590494
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 寄生虫学(含衛生動物学)
• 研究機関: 慶應義塾大学
• 研究代表者: 浅井 隆志 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (30159355)
• 研究分担者: 今田 美穂子 慶應義塾大学, 医学部, 助教 (50445201)
• 研究期間 (年度): 2011 – 2013
• キーワード: トキソプラズマ / ピルビン酸キナーゼII / ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ

研究概要

トキソプラズマのミトコンドリアとアピコプラストには生理的役割が不明なピルビン酸キナーゼIIが存在する。この酵素の役割を知るためにその基質供給系を検討した。まずPEPCKの遺伝子組み換え体（合計２種類）を作製する実験を行った。遺伝子組み換え体はPCR法によりトキソプラズマRH株のcDNAより増幅し、発現ベクターであるpGEX系に挿入する方法を最初に行った。最後に低温で発現を行うpCold TFベクター系でのPEPCKとの融合タンパク質の発現に成功した。II型のPEPCKは全く検出されなかったが、PCR装置、Taqポリメラーゼ、アニーリング温度を変換するなどの検討を行い、検出に成功した。

研究成果

• [雑誌論文] The utility of cerebrospinal fluid for the molecular diagnosis of toxoplasmic encephalitis (2013)
  • 著者名/発表者名: Mikita K.,Maeda T.,Ono T.,Miyahira Y.,Asai T., Kawana A.
  • 雑誌名: Diagnostic Microbiology and Infectious Disease 巻: 75 ページ: 155-159
  • DOI: 10.1016/j.diagmicr-obiol.2012.10.015
  • 査読あり
• [雑誌論文] トキソプラズマ脳炎のPCR検査法 (2013)
  • 著者名/発表者名: 浅井隆志
  • 雑誌名: Clin Neuro 巻: 53 ページ: 297-298
  • URL: http://www.neurology-jp.org/
• [雑誌論文] 感染症症候群(第2版) (2013)
  • 著者名/発表者名: 浅井隆志
  • 雑誌名: 鞭虫症(別冊日本臨床新領域別症候群シリーズ) 巻: 24 ページ: 710-711
• [雑誌論文] 抗寄生虫薬 (2011)
  • 著者名/発表者名: 浅井隆志
  • 雑誌名: 感染症診療実践ガイドMedical Practice 巻: 28 ページ: 157-165
  • URL: http://www.bunkodo.co.jp
• [雑誌論文] 寄生虫感染症 (2011)
  • 著者名/発表者名: 浅井隆志
  • 雑誌名: 感染症診療実践ガイドMedical Practice 巻: 28 ページ: 498-505
  • URL: http://www.bunkodo.co.jp
• [学会発表] 海外渡航において注意するべき寄生虫症 (2014)
  • 著者名/発表者名: 浅井隆志
  • 学会等名: 日本環境感染学会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2014-02-14
• [学会発表] トキソプラズマ原虫由来ピルビン酸キナーゼIIの結晶学的研究 (2013)
  • 著者名/発表者名: 出口翔平、浅井隆志、他4名
  • 学会等名: 日本生化学会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 20130911-13
• [学会発表] トキソプラズマ脳炎のPCR検査法 (2013)
  • 著者名/発表者名: 浅井隆志
  • 学会等名: 日本神経学会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2013-05-31
• [学会発表] 我が国におけるトキソプラズマ症の現状と問題点 (2013)
  • 著者名/発表者名: 前田卓哉、浅井隆志、他12名
  • 学会等名: 日本寄生虫学会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2013-03-31
• [学会発表] トキソプラズマのミトコンドリアでのPEP供給源の検索 (2012)
  • 著者名/発表者名: 浅井隆志,坪井絵莉子、今田美穂子、神川龍馬、橋本哲男
  • 学会等名: 日本寄生虫学会
  • 発表場所: 兵庫県西宮市
  • 年月日: 2012-03-22
• [図書] Toxoplasma gondii Chapter 8; Biochemistry and Metabolism of Toxoplasma gondii : Carbohydrates, Lipids and Nucleotides (2013)
  • 著者名/発表者名: Coppens I., Asai T., Tomavo S., (Weiss L. M and Kim K. 2nd Eds)
  • 総ページ数: 255-288
  • 出版者: Academic Press
• [図書] 医動物検査(2臨床形態検査) (2013)
  • 著者名/発表者名: 浅井隆志、田邊将信、小林正規
  • 総ページ数: 174-205
  • 出版者: Medical View