| 研究概要 |
我々は、Streptococcus intermedius (SI)の主要な病原因子インターメディリシン（ILY）をコードするily遺伝子の発現制御機構を解明することでSIの病原性発現機構を理解する目的で研究を進めている。これまでに我々は、この遺伝子がcatabolite control protein Aやlactose phosphotransferase system repressor (LacR)によって制御されていることを明らかにした。なお本研究では、DNAプルダウンアッセイを行うことによりLacRが実際にilyプロモーター領域に相互作用することで発現調節を行っていることを確認した。さらに、lacR遺伝子に変異を持つILY過剰産生株が、ヒト由来培養細胞（HepG2）に対して強い細胞毒性を示すことを明らかにした。また、深部膿瘍から分離されたILY高産生株の多くがlacR遺伝子に変異を持つことも発見した。
さらに、FBSに含まれるily発現を活性化する因子の同定を試みた結果、この因子の一つがα1-アンチトリプシン（α1AT）であることを発見した。また、この活性化にはα1ATの糖鎖の分解産物が関わっている可能性が高いというデータを得ることにも成功した。 なおSIは、Sialidase, β-galactosidase, β-N-acetylglucosaminidase, β-N-acetylgalactosaminidaseなどのグリコシダーゼ活性を保有していることが報告されているが、Sialidase以外のグリコシダーゼは同定されていなかった。そこでSIゲノム中のグリコシダーゼを探索した結果、lacRオペロン中に新規のグリコシダーゼ（MsgA）をコードする遺伝子が存在することを明らかにした。そこで、この遺伝子の破壊株を作製し、この株のグリコシダーゼ活性を調べた結果、MsgAはβ-galactosidase, β-fucosidase, β-N-acetylglucosaminidase, β-N-acetylgalactosaminidase活性を保持していることを発見した。さらに、少量ではあるがSI培養液と菌体表面からMsgAの精製にも成功し、この酵素を用いてKm値などの酵素パラメーターの決定を行った。
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