2011 年度実施状況報告書

細胞外マトリックスを使用したヒト骨髄異形成症候群特異的ｉＰＳ細胞長期培養系樹立

研究課題

研究課題/領域番号	23590660
研究機関	群馬大学
研究代表者	半田寛群馬大学, 医学部, 講師 (90282409)
研究分担者	村上博和群馬大学, 保健学研究科, 教授 (40166260)
研究期間 (年度)	2011-04-28 – 2014-03-31
キーワード	疾患特異的iPS細胞 / 骨髄異形成症候群 / 長期培養 / 細胞外マトリックス
研究概要	ヒトiPS細胞はOct4, SOX2, Klf4, c-Mycの4つの遺伝子を皮膚線維芽細胞に導入し、リプログラミングすることによって多分化能と不死性を持たせることに成功したES細胞と同じ多能性幹細胞である。近年のiPS細胞研究の発達により、これが疾患治療と疾患モデル作成に利用できる可能性が示されつつある。本研究は、in vitroで再現困難な骨髄異形成症候群(MDS)のモデル作製を目的とし、cell free系である細胞外マトリックスを使用した疾患特異的iPS細胞の長期培養維持する方法樹立することを目的としている。今年度は、MDS患者より採取した骨髄細胞よりCD34陽性幹細胞分画を分離し、細胞外マトリックス上で長期培養が可能かどうかを検討した。現段階では、通常の培養条件よりは長期である30日以上の培養は可能なようであるが、MDSに特徴的な形態異常を再現しているかについては確認できていない。さらに現在iPS細胞作製に必要な転写因子Oct-4, Sox-2, Klf-4, NANOGを組み込んだレトロウイルスベクターを作成して、導入に必要な条件を整えている。購入した線維芽細胞に上記のウイルスを感染させ、遺伝子を効率的に導入できているかを確認中である。これにより十分な効率でiPS細胞を樹立できれば、造血細胞である臍帯血細胞に感染させることによって、まず正常造血細胞のiPSを作製し、その特徴を検討する。
現在までの達成度 (区分)	現在までの達成度 (区分) 3: やや遅れている理由今年度で、正常細胞のiPS樹立まで到達する予定であったが、作成に不慣れなことと人員が不足していたため、樹立に至っていない。
今後の研究の推進方策	今年入学した大学院生の協力を得て、疾患特異的iPS細胞の樹立を目指す。
次年度の研究費の使用計画	「当該研究費が生じた理由」今年度で、正常細胞のiPS樹立まで到達する予定であったが、作成に不慣れなことと人員が不足していたため、樹立に至っていない。「翌年度以降に請求する研究費とあわせた使用計画」iPS細胞樹立のために、レトロウイルスベクターのみならず、センダイウイルスベクターやmicroRNAを用いた方法にもチャレンジする。本来の目的であるMDS細胞の長期培養を可能にするために、ラミニン511以外の細胞外マトリックスも検討する。