| 研究課題/領域番号 |
23590702
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| 研究機関 | 防衛医科大学校(医学教育部医学科進学課程及び専門課程、動物実験施設、共同利用研究 |
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研究代表者 |
尾田 高志 防衛医科大学校(医学教育部医学科進学課程及び専門課程、動物実験施設、共同利用研究, 病院, 講師 (90531187)
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| 研究分担者 |
熊谷 裕生 防衛医科大学校(医学教育部医学科進学課程及び専門課程、動物実験施設、共同利用研究, 医学教育部医学科専門課程, 教授 (50170048)
櫻井 裕 防衛医科大学校(医学教育部医学科進学課程及び専門課程、動物実験施設、共同利用研究, 医学教育部医学科専門課程, 教授 (00235227)
山上 和夫 防衛医科大学校(医学教育部医学科進学課程及び専門課程、動物実験施設、共同利用研究, 医学教育部医学科専門課程, 准教授 (20531437)
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| キーワード | 尿解析 / 腎疾患 |
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| 研究概要 |
腎生検に比較し、尿検査は非侵襲的で、腎臓全体の病態を反映して変化する可能性から診断・予後判定上の有用性が考えられる。そこで、尿沈渣中の細胞成分や尿上清中の蛋白質を解析することにより、より正確で安全な腎疾患の診断や予後判定を確立することを目的として研究を進めている。初年度に採取を開始し保存してきた、各種腎疾患患者の尿検体は、約200例となった。パイロットスタディーの結果に基づき、腎臓由来の細胞のマーカーとして、CD68(マクロファージ)、好中球エラスターゼ(好中球)、サイトケラチン(尿細管上皮細胞)、クローディン1(ボーマンのう上皮細胞)、シナプトポディン(足細胞/ポドサイト) を使用することを決定した。これらに対する抗体を使用して、200例の患者の尿沈渣中の細胞を、蛍光免疫細胞染色で同定・評価した。さらに、これらのうち、腎臓の炎症と関連がみられそうであった、マクロファージ、ボーマンのう上皮細胞に関しては、それらマーカーのmRNA発現をreal time RT-PCR法により定量した。今後、これらの結果と、臨床検査所見・腎生検組織所見から評価した腎疾患の診断や活動性との関連を検討し、臨床応用を考え、検討したマーカーのなかで、腎疾患の診断や病状・予後判定に有用な解析を選び出し、中でも感度・特異度の面から最も有効で、簡易な尿検査法の組み合わせを、各マーカーに関するROCカーブを作成し、決定する予定である。これは、より安全で効果的な、腎疾患治療体系の確立につながることから、非常に意義深いものと考える。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
当初の予定は、平成23年から3年をかけて、解析する尿サンプルを採集、保存することとし、サンプル数の目標は150例としていた。尿サンプルの採集、処理、保存は、予定よりも早く、順調に進み、目標数に到達した。さらに、一部のサイトスピンスライドを用いて、パイロット的に蛍光免疫細胞染色を実施し、尿沈渣中の細胞としてマクロファージ、好中球、尿細管上皮細胞、ボーマンのう上皮細胞、足細胞の同定に使用可能な抗体を決定した。これらの抗体を使用して、全例の尿沈渣細胞を染色し、細胞数を評価した。この結果から、腎臓の炎症との関連性が示唆された、マクロファージ、ボーマンのう上皮細胞に関しては、それらマーカーのmRNA発現をreal time RT-PCR法により定量できた。ただし、FACSや、尿上清中の蛋白の解析は、まだ実施できていない。
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| 今後の研究の推進方策 |
尿沈渣細胞のFACSによる解析は、死細胞による非特異的なバックグランドを消すことができず、中断することも視野に入れている。今後は、評価できた尿沈渣細胞数のレベルや、そのmRNA発現レベルに関する結果と、臨床検査所見・腎生検組織所見から評価した腎疾患の診断や活動性との関連性を検討する。さらに、各マーカーに関するROCカーブを作成し、感度・特異度の面から各種マーカーのなかで、腎疾患の診断や病状・予後判定に最も有用な尿検査法を評価・決定する予定である。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
次年度は、さらにサンプル数を増やして、real time RT-PCRを実施する予定で、必要な、primer/probe、反応試薬などの消耗品に約70万円、情報入手のため、図書・雑誌に約50万円、国内・国際学会参加費として約50万円、合計約170万円を使用する予定である。
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