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2012 年度 実施状況報告書

家族性Moyamoya病の分子発症機構の解明と脳血管疾患の予防医療の確立

研究課題

研究課題/領域番号 23590741
研究機関京都大学

研究代表者

人見 敏明  京都大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (90405275)

キーワードMoyamoya病 / 脳血管疾患 / iPS細胞 / 予防医学 / Mysterin
研究概要

日本人に多い脳血管疾患の中で、Moyamoya 病、脳動脈瘤および脳動静脈奇形は遺伝的負荷が強い。特にMoyamoya 病は若年性脳梗塞の原因となるが、その感受性遺伝子は不明であった。我々は、常染色体優性遺伝形式を示す3 世代家系でのPositional Cloning を行い、遺伝子座17q25.3にMoyamoya 病感受性遺伝子として新規タンパクをコードするMysterin を特定した。
本研究では、①Moyamoya 病患者よりiPS 細胞の樹立と血管平滑筋および内皮細胞、マクロファージへの分化②細胞生物学的観察とMysterin の発現解析、③Mysterin と他分子とのcrosstalk について検討することにより、脳血管疾患に共通した脳血管特異的な機能上、構造上の分子メカニズムを解明し、脳血管疾患の新たな予防医療の確立を目指す。
家族性もやもや病患者3名から樹立したもやもや病特異的iPS細胞から内皮細胞へ分化誘導を行い、TRA1-60陰性、Flk1およびVE-cadherin共陽性である細胞をフローサイトメトリーで単離し、血管内皮マーカー(CD31, VE-cadherin, vWF, CD34)の発現をRealtime-PCR、免疫染色法で確認し、得られた細胞が血管内皮細胞として機能していることが分かった。Realtime-PCRにより分化誘導した血管内皮細胞でMysterinの発現をRNAレベルで検討した。今後は、もやもや病非発症者由来のiPS細胞より分化した内皮細胞と比較検討を行い、もやもや病の本態である内頸動脈閉塞に果たす役割の解明が課題である。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

1: 当初の計画以上に進展している

理由

現在までに、3世代にわたる常染色体優性遺伝形式で伝達されている家族性Moyamoya病家系の研究参加者由来のiPS細胞コロニーを樹立し、免疫染色、定量的PCR、胚様体形成、奇形種形成、核型解析、エピゲノム解析、Short tandem repeat解析を行い、得られたコロニーから最適なクローンを選択できた。
得られたMoyamoya病患者由来のiPS細胞クローンから内皮細胞への分化誘導、TRA1-60陰性、Flk1およびVE-cadherin共陽性である細胞をフローサイトメトリーで単離し、血管内皮マーカー(CD31, VE-cadherin, vWF, CD34)の発現をRealtime-PCR、免疫染色法で確認し、得られた細胞が血管内皮細胞として機能していることが分かった。またRealtime-PCRにより分化誘導した血管内皮細胞でMysterinの発現をRNAレベルで遺伝子発現解析を行った。
iPS細胞の樹立ともやもや病の罹患細胞腫である内皮細胞への分化、血管内皮細胞の細胞生物学的観察とMysterinの遺伝子発現解析より、本年度の研究目的に達成していると考える。

今後の研究の推進方策

本年度で得られたMoyamoya病患者由来の血管内皮細胞を用いて細胞増殖など細胞生物学的な観察を行う。またMoyamoya病患者の血管内皮細胞由来のcDNAを用いたDNAマイクロアレイによって網羅的遺伝子発現の解析を行い、更に、血管新生に関わるシグナル伝達経路を標的として解析し、シグナル伝達の異常からMysterinとcross-talkする分子を特定する。

次年度の研究費の使用計画

該当なし。

  • 研究成果

    (11件)

すべて 2013 2012 その他

すべて 雑誌論文 (4件) (うち査読あり 4件) 学会発表 (5件) 図書 (1件) 備考 (1件)

  • [雑誌論文] Ablation of Rnf213 retards progression of diabetes in the Akita mouse2013

    • 著者名/発表者名
      Kobayashi H, Hitomi T, Koizumi A. et al.
    • 雑誌名

      Biochem Biophys Res Commun

      巻: 432(3) ページ: 519-525

    • DOI

      10.1016/j.bbrc.2013.02.015

    • 査読あり
  • [雑誌論文] P.R4810K, a polymorphism of RNF213, the susceptibility gene for moyamoya disease, is associated with blood pressure.2013

    • 著者名/発表者名
      Koizumi A, Kobayashi H, Liu W, Fujii Y, Senevirathna ST, Nanayakkara S, Okuda H, Hitomi T, Harada KH, Takenaka K, Watanabe T, Shimbo S
    • 雑誌名

      Environ. Health Prev. Med.

      巻: 18 ページ: 121-9

    • DOI

      10.1007/s12199-012-0299-1

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Combined linkage analysis and exome sequencing identifies novel genes for familial goiter2013

    • 著者名/発表者名
      Yan JX, Takahashi T, Ohura T, Adachi A, Takahashi I, Ogawa E, Okuda H, Kobayashi H, Hitomi T, Liu WY, Harada KH, Koizumi A
    • 雑誌名

      J Hum Genet.

      巻: - ページ: 印刷中

    • DOI

      10.1038/jhg.2013.20

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Perillyl alcohol causes G1 arrest through p15(INK4b) and p21(WAF1/Cip1) induction.2013

    • 著者名/発表者名
      Koyama M, Sowa Y, Hitomi T, Izumi Y, Watanabe M, Taniguchi T, Ichikawa M, Sakai T.
    • 雑誌名

      Oncol Rep

      巻: 29 ページ: 779-84

    • DOI

      10.3892/or.2012.2167.

    • 査読あり
  • [学会発表] もやもや病特異的iPS細胞の血管内皮細胞への分化誘導2013

    • 著者名/発表者名
      人見敏明
    • 学会等名
      第83回日本衛生学会総会
    • 発表場所
      金沢大学
    • 年月日
      20130324-26
  • [学会発表] 白人人口のもやもや病のゲノムワイド関連研究2013

    • 著者名/発表者名
      劉万洋、STMLD Senevirathna、人見敏明、小林果、原田浩二、小泉昭夫
    • 学会等名
      第83回日本衛生学会総会
    • 発表場所
      金沢大学
    • 年月日
      20130324-20130326
  • [学会発表] Mysterin遺伝子欠損によるAkitaマウス糖尿病進行の遅延2013

    • 著者名/発表者名
      小林果、劉万洋、厳俊霞、藤井由希子、奥田裕子、人見敏明、原田浩二、小泉昭夫
    • 学会等名
      第83回日本衛生学会総会
    • 発表場所
      金沢大学
    • 年月日
      20130324-20130326
  • [学会発表] Exome解析による家族性甲状腺種に関連する新規遺伝子の同定2013

    • 著者名/発表者名
      厳俊霞、高橋勉、大浦敏博、奥田裕子、小林果、人見敏明、劉万洋、原田浩二、小泉昭夫
    • 学会等名
      第83回日本衛生学会総会
    • 発表場所
      金沢大学
    • 年月日
      20130324-20130326
  • [学会発表] 東アジアに共通するもやもや病の感受性遺伝子Mysterin2012

    • 著者名/発表者名
      峰晴陽平、小泉昭夫、箸方宏州、Wanyang Liu、小林果、人見敏明、菊田健一郎、高木康志、橋本信夫、宮本享
    • 学会等名
      第37回日本脳卒中学会総会
    • 発表場所
      福岡国際会議場
    • 年月日
      20120426-20120428
  • [図書] もやもや病感受性遺伝子の特定2013

    • 著者名/発表者名
      小林果, 人見敏明, 小泉昭夫
    • 総ページ数
      87-91
    • 出版者
      BioClinica.
  • [備考] 京都大学大学院医学研究科 環境衛生学分野

    • URL

      http://130.54.180.142/index.htm

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公開日: 2014-07-24  

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