| 研究課題/領域番号 |
23590853
|
|---|
| 研究機関 | 長崎大学 |
|---|
研究代表者 |
賀川 慎一郎 長崎大学, 医歯(薬)学総合研究科, 研究員 (70562213)
|
|---|
| 研究分担者 |
中園 一郎 長崎大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (30108287)
池松 和哉 長崎大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (80332857)
梅原 敬弘 長崎大学, 医歯(薬)学総合研究科, 助教 (60617421)
|
|---|
| キーワード | 創傷治癒 / 法医病理学 |
|---|
| 研究概要 |
法医実務における損傷受傷時期の診断は極めて重要な命題である。しかし、受傷後早期（３～５日）の受傷時期の証明は極めて困難である。しかも、この時期の蛋白質発現動態は全く未知であるために、蛋白質マーカーを利用した解析法を用いることも不可能である。そこで、申請者らは、プロテオーム解析法を用いて、この時期の一部の蛋白質発現動態を検索した。具体的には、6週齢BALB/cマウスの背部に 打ち抜き損傷を作製し、2次元電気泳動法を行い、スポットを銀染色にて確認した。解析対象は受傷三日後で、controlとして打ち抜き直後を用い、皮膚損傷部における蛋白質発現状態を直接的に比較した。1回の泳動にて2000程度のspot出現を確認し、かつ、受傷後３日に特異的発現するspotを30個程度見出した。この中で、最大の発現有意差を認めたspotについては、MALDI-TOF-MSにて蛋白質同定検索を行い、chilinase 3-like 3（Chi3l3）と同定した。さらに、遺伝子発現量をReal Time PCR法にて検討し、Chi3l3 mRNAが受傷後3日という時期に、特異的な爆発的発現（他時期に比して400倍！）が認められた。さらに、Chi3l3のプチチドを作成し、アルブミンと結合後に家兎に免疫し、Chi3l3抗体を作成た。得られた抗体を用いて、Wetern blottingを行ったところ、受傷後3日での蛋白質の特異的増加を確認した。また、免疫組織学的検討を行ったところ、Chi3l3はマクロファージに発現しており、やはり受傷後3日に組織学的にも増加が確認可能であった。現在ヒト組織を用いてChi3l3の発現を確認している。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本研究の最大の難関と考えられたChi3l3の抗体作成にて、パラフィン包埋切片にても使用可能な抗体を作成でき、ヒト組織での検討を始めることができたため。
|
| 今後の研究の推進方策 |
法医剖検例を対象にChi3l3の発現を確認する。特に、パラフィン包埋切片を対象とすることとなるので、免疫賦活剤の添加等の方策を考えたい。
|
| 次年度の研究費の使用計画 |
高感度の免疫染色を施行するための試薬購入を第１義に考えている。
|
