| 研究課題/領域番号 |
23590859
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| 研究機関 | 日本医科大学 |
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研究代表者 |
林田 眞喜子 日本医科大学, 医学部, 准教授 (60164977)
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| 研究分担者 |
山口 晃志 日本医科大学, 医学部, 助教 (90465344)
植草 協子 日本医科大学, 医学部, その他 (50409215)
工藤 恵子 九州大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (10186405)
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| 研究期間 (年度) |
2011-04-28 – 2014-03-31
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| キーワード | 法医中毒学 / 質量分析 / 薬物中毒 / ベンゾジアゼピン系薬物 / QTOF / LC-MS-MS / 生体試料 |
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| 研究概要 |
本研究は，QTOF質量分析装置を用いてベンゾジアゼピン系薬物ならびに代謝物の高感度・高選択的な分析法を開発することを目的とする．イオン抑制効果を含めたベンゾジアゼピン系薬物ならびに代謝物のLC-MS-MS質量データベース，QTOF精密質量データベースを作成し，ベンゾジアゼピン系薬物中毒患者試料や剖検資料へ応用する。H23年度は，基盤研究(C)課題番号19590682「質量分析の新技法を用いたベンゾジアゼピン系薬物分析法の再構築（H19-H22)」で作成した精密質量データベースに加えて，ベンゾジアゼピン系薬物のプロダクトイオン理論値と実測値の標準的データをライブラリに集積，スペクトルライブラリを構築しベンゾジアゼピン系薬物トリガーMRM法を確立した．トリガーMRM法は各薬物の主要８イオンで再構成されたスペクトルをデータベース検索できるもので，強度の高いプリカーサーイオンとプロダクトイオン1種類の組み合わせで測定していた従来のターゲットMRM分析の弱点を補う方法であり，ベンゾジアゼピン系薬物の確認には有効であった．一方，精密質量データベースを使用するＬＣ/ＱＴＯＦ-ＭＳ(QTOF)を用いて，ＭＳＭＳ構造相関（ＭＳＣ）プログラムの包括的アプローチを検討した．ＱＴＯＦ分析は陽イオンモードと陰イオンモードで測定，ベンゾジアゼピン系薬物の保持時間と精密質量データベースを使用し，0.02ｄａのマスウィンドウおよび１ｍｉｎの保持時間ウィンドウを備えた(M+H)+種の抽出するイオンを抽出，さらにMolecular Feature Extraction （ＭＦＥ）を用いてイオンを絞り込んだ．生体試料を用いてのＱＴＯＦ精密質量データベースの検出限界は１０ng/ml，ＭＦＥでは5000カウント以上の化合物が識別されたが，多くの擬陽性イオンも観察された．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
1: 当初の計画以上に進展している
理由
ベンゾジアゼピン系薬物トリガーMRM法を確立，ベンゾジアゼピン系薬物の確認に確実性が増したこと，ＱＴＯＦ精密質量データベース、ＭＳＭＳライブラリおよびＭＳＣプログラムを使用する包括的アプローチは非常に有用であることが明確となったことから，当初の計画以上の進展が見込まれる．
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| 今後の研究の推進方策 |
平成２３年度に得られた結果を基にして，ベンゾジアゼピン系薬物ならびに代謝物のQTOF分析，QTOFターゲット分析のための分析メソッドの最適化を再度行い，QTOF分析に適した試料抽出法を検討する．救命救急センター収容のベンゾジアゼピン系薬物中毒患者試料あるいはベンゾジアゼピン系薬物が関連した剖検資料について，LC-MS-MS質量データベースを用いたQTOFターゲット分析を行う．ベンゾジアゼピン系薬物を含む法医中毒学ライブラリを用いたQTOFターゲット分析の評価を行う．精密質量データベースとLC-MS-MS質量データベースを用いたQTOFターゲット分析の結果を比較考察し，ベンゾジアゼピン系薬物代謝物の定量性についても考察する．生体試料を用いてのＱＴＯＦ/ＭＦＥ分析における識別能の向上を検討し，併せてベンゾジアゼピン系薬物を含む法医中毒学ライブラリを用いたQTOFターゲット分析について総合的な評価を行う．
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| 次年度の研究費の使用計画 |
１．ベンゾジアゼピン系薬物ならびに代謝物のQTOF分析．QTOFターゲット分析のための分析メソッドの最適化．QTOF分析に適した試料抽出法の検討．２．ベンゾジアゼピン系薬物中毒患者試料へのLC-MS-MS質量データベースの応用．救命救急センター収容のベンゾジアゼピン系薬物中毒患者試料あるいはベンゾジアゼピン系薬物が関連した剖検資料について，LC-MS-MS質量データベースを用いたQTOFターゲット分析を行う．３．ベンゾジアゼピン系薬物を含む法医中毒学ライブラリを用いたQTOFターゲット分析の評価．精密質量データベースとLC-MS-MS質量データベースを用いたQTOFターゲット分析の結果を比較考察する．ベンゾジアゼピン系薬物代謝物の定量性についても考察する．ベンゾジアゼピン系薬物を含む法医中毒学ライブラリを用いてQTOFターゲット分析を評価する．以上，得られた結果をとりまとめ，国内外の法医中毒学関連学会ならびに雑誌における成果の発表を行う．
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