| 研究概要 |
昨年同様アレクサンダー細胞株における組み込み部位の解析を行った。この細胞株はHBV粒子そのものを産生するわけではないが、HBs抗原を産生し、細胞外に分泌することがわかっている。
FISH (fluorescence in situ hybridization)法により細胞核DNAに組み込まれたHBV DNAがどの部分に由来するかを調べた。市販のFISH probe 11種類を用いて実験を行ったが、アレクサンダー細胞の核にはシグナルは確認できなかった。そこでdigoxigeninでプローブをラベルし、FISHを行ったところ、HBｘのプロモーター領域に置いたプローブ、HBx領域の前半分に置いたプローブでのみ蛍光シグナルが確認され、HBVの組み込みがこの近傍で起きていることが示唆された。
そこでX領域前半及びX領域の上流に複数のプライマー（フォワード）を設計し、プライマー（リバース）としてAlu配列を用いたプライマーを用いてAlu-PCRを行った。また、プライマー（フォワード）としてAlu配列を用いたプライマー、プライマー（リバース）としてX領域前半及びX領域の上流の複数のプライマーを用いたAlu-PCRも行った。
アレクサンダー細胞株へのHBVの組み込みは解析した多くのクローンで認められたが、その大部分は第５染色体の非翻訳領域（Chromosome 5: 1, 297, 221-1, 297, 605）への組み込みであった。組み込まれた部分の配列は（図）に示す通りであった。なお、１クローンだけであるが、TMP 195遺伝子のエクソン上への組み込みが認められた。TMP 195は肝臓に多い細胞膜蛋白であるが、その性質、機能に関しては不明である。
なお、臨床検体を用いた組み込みの実態に関しては次世代シークエンサーを用いた検討がほぼ終了し、現在解析中である。
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