| 研究概要 |
まずPLC/PRF/5細胞のDNAに組み込まれたHBV DNAがどの部分に由来するかをFISH法により調べた。digoxigeninでプローブをラベルし、FISHを行ったところ、HBｘのプロモーター領域に置いたプローブ、HBx領域の前半分に置いたプローブでのみ蛍光シグナルが確認され、Alu-PCRでさらに検討したところ第５染色体の非翻訳領域への組み込みが認められた。
HBx領域のCPG islandのメチル化をMethylation Specific PCRを用いて調べたところ、サンプル間、部位間でのばらつきが認められ、メチル化率は10-20%と健常者のリンパ球に比べて低かった。組み込み後のメチル化が不十分でサイレンシングが起きない遺伝子が存在することが明らかになった。
解析をさらに網羅的に行うために、次世代シークエンサーを用いた解析を行った。Genotype AからJのシークエンスのすべてをカバーするようにbaitを作成し、得られたPCR産物中に含まれるヒトゲノムの解析を行った。第3, 4, 8, 10, 11, 12, 13, 16, 17, 18染色体上への組み込みが認められた。
次いでＢ型肝癌の臨床症例における解析を行った。6例の肝細胞癌の症例の切除標本に対してアレクサンダー株と同様の方法で解析を行った。組み込みのパタンは細胞株同様広汎であり、第13、20染色体以外のすべての接触体上に組み込みが認められた。腫瘍部、非腫瘍部双方への組み込みが認められた。エクソンへの組み込みは認められなかった。SLC6A13（Neurotransmitter Transporter）, FN1（fibronectin 1）遺伝子が複数サンプルに組み込みが認められた。
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