アダプター蛋白質Ｇａｂ１をターゲットとした新規肝癌分子標的治療法の開発

2013 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 23590974
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 吉田 雄一 大阪大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (30457014)
• 研究分担者: 木曽 真一 大阪大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (40335352) ; 渡部 健二 大阪大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (50379244) ; 筒井 秀作 大阪大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (10359846)
• キーワード: 肝細胞癌 / Gab1

研究概要

【目的】昨年までの検討で肝細胞Gab1欠損がマウス肝線維化を増強し、その過程において肝細胞Gab1欠損が肝線維化促進作用を有するケモカインCCL5誘導を引き起こし結果的に肝線維化を増強させることを示した。最終年においては、肝細胞Gab1が肝内慢性炎症→線維化（肝硬変）→肝発癌過程において病態促進に働く分子機序について検討を行った。【方法】1）肝特異的Gab1欠損マウス（KO）及び対照マウス(WT)に対して、BDLを施行し、コラゲナーゼ還流法を用いて、肝細胞分画及び非実質分画に分離し、それぞれの遺伝子発現を比較した。２)KO及びWTマウスより、初代培養肝細胞を分離し、LPS刺激によるCCL5発現誘導について検討を行った。３）マウス肝細胞細胞株BNL-CL2に対して、siRNA を用いてGab1をノックダウン（KD）し、２）と同様にLPS刺激を行い、肝細胞Gab1欠損が、LPS刺激による肝細胞内炎症シグナルに与える影響について検討を行った。【成績】１）BDL後の肝細胞分画、非実質分画の遺伝子発現の検討では、肝細胞分画においては、WTに比しKOにおいて、CCL5遺伝子発現の亢進を認めた。一方で、非実質分画においては、WTとKOの間に、CCL5遺伝子発現の差を認めなかった。2）KOマウスからの初代培養肝細胞を用いた検討では、KOではWTに比しLPS刺激による肝細胞CCL5遺伝子発現の亢進ならびに同培養上清中のCCL5蛋白発現亢進を認めた。３）Gab1KD細胞においてはコントロール細胞に比し、LPS刺激による代表的な炎症シグナルであるNF-kBの活性化が有意に増強していた。【考案及び結語】本研究期間における検討において、肝細胞Gab1が慢性炎症による肝内炎症シグナル制御を介して、肝線維化さらにはその後の肝発癌に保護的に作用している可能性が示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] Lipid overloading during liver regeneration causes delayed hepatocyte DNA replication by increasing ER stress in mice with simple hepatic steatosis. (2014)
  • 著者名/発表者名: Hamano M, Ezaki H, Kiso S, Furuta K, Egawa M, Kizu T, Chatani N, Kamada Y, Yoshida Y, Takehara T.
  • 雑誌名: J Gastroenterol. 巻: 49 ページ: 305, 316
  • DOI: 10.1007/s00535-013-0780-7.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Conditional knockout of heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor in the liver accelerates carbon tetrachloride-induced liver injury in mice. (2013)
  • 著者名/発表者名: Takemura T, Yoshida Y, Kiso S, Kizu T, Furuta K, Ezaki H, Hamano M, Egawa M, Chatani N, Kamada Y, Imai Y, Higashiyama S, Iwamoto R, Mekada E, Takehara T.
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun. 巻: 437 ページ: 185, 191
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2013.05.097.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Pitavastatin ameliorated the progression of steatohepatitis in ovariectomized mice fed a high fat and high cholesterol diet. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kamada Y, Kiso S, Yoshida Y, Chatani N, Kizu T, Hamano M, Egawa M, Takemura T, Ezaki H, Furuta K, Hayashi N, Takehara T.
  • 雑誌名: Hepatol Res. 巻: 43 ページ: 401, 412
  • DOI: 10.1111/j.1872-034X.2012.01082.x.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Conditional knockout of heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor in the liver accelerates carbon tetrachloride-induced liver injury in mice. (2013)
  • 著者名/発表者名: Takemura T, Yoshida Y, Kiso S, Saji Y, Ezaki H, Hamano M, Kizu T, Egawa M, Chatani N, Furuta K, Kamada Y, Iwamoto R, Mekada E, Higashiyama S, Hayashi N, Takehara T.
  • 雑誌名: Hepatol Res. 巻: 43 ページ: 384, 393
  • DOI: 10.1111/j.1872-034X.2012.01074.x.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Kamada Y, Fujii H, Fujii H, Sawai Y, Doi Y, Uozumi N, Mizutani K, Akita M, Sato M, Kida S, Kinoshita N, Matuyama N, Yakushijin T, Miyazaki M, Ezaki H, Hiramatsu N, Yoshida Y, Kiso S, Imai Y, Kawada N, Takehara T, Miyoshi E. Serum Mac-2 binding protein levels as a novel diagnostic biomarker for prediction of disease severity and nonalcoholic steatohepatitis. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kamada Y, Fujii H, Fujii H, Sawai Y, Doi Y, Uozumi N, Mizutani K, Akita M, Sato M, Kida S, Kinoshita N, Maruyama N, Yakushijin T, Miyazaki M, Ezaki H, Hiramatsu N, Yoshida Y, Kiso S, Imai Y, Kawada N, Takehara T, Miyoshi E.
  • 雑誌名: Proteomics Clin Appl. 巻: 7 ページ: 648, 656
  • DOI: 10.1002/prca.201200137.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Serum fucosylated haptoglobin as a novel diagnostic biomarker for predicting hepatocyte ballooning and nonalcoholic steatohepatitis. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kamada Y, Akita M, Takeda Y, Yamada S, Fujii H, Sawai Y, Doi Y, Asazawa H, Nakayama K, Mizutani K, Fujii H, Yakushijin T, Miyazaki M, Ezaki H, Hiramatsu N, Yoshida Y, Kiso S, Imai Y, Kawada N, Takehara T, Miyoshi E.
  • 雑誌名: PLoS One. 巻: 8 ページ: e66328
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0066328
  • 査読あり
• [学会発表] Loss of Gab1 scaffolding adaptor protein in the hepatocytes exacerbates cholestasis-induced liver fibrosis in mice (2013)
  • 著者名/発表者名: Takashi Kizu, Yuichi Yoshida, Kunimaro Furuta, Satoshi Ogura, Mayumi Egawa, Norihiro Chatani, Mina Hamano, Hisao Ezaki, Yoshihiro Kamada, Shinichi. Kiso, Tetsuo Takehara
  • 学会等名: The 64th Annual Meeting of the American Association for the Study of Liver Diseases
  • 発表場所: Walter E. Washington Convention Center, Washington DC, USA
  • 年月日: 20131101-20131105
• [学会発表] Lack of secreted frizzled-related protein 5 (Sfrp5), an adipocytokine, enhanced carbon-tetrachloride-induced liver fibrosis in mice (2013)
  • 著者名/発表者名: Norihiro Chatani, Yoshihiro Kamada, Takashi Kizu, Satoshi Ogura, Kunimaro Furuta, Mayumi Egawa, Mina Hamano, Hisao Ezaki, Shinichi. Kiso, Akihiko Shimano, Noriyuki Ouchi, Yuichi Yoshida, Tetsuo Takehara
  • 学会等名: The 64th Annual Meeting of the American Association for the Study of Liver Diseases
  • 発表場所: Walter E. Washington Convention Center, Washington DC, USA
  • 年月日: 20131101-20131105
• [学会発表] Serum Mac-2 binding protein levels as a novel diagnostic biomarker for prediction of disease severity and nonalcoholic steatohepatitis (2013)
  • 著者名/発表者名: Yoshihiro Kamada, Hideki Fujii, Hironobu Fujii, Yoshinori Doi, Kayo Mizutani, Maaya Akita, Motoya Sato, Sachiho Kida, Noriaki Kinoshita, Nobuhiro Maruyama, Takayuki Yakushijin, Masanori Miyazaki, Hisao Ezaki, Naoki Hiramatsu, Yuichi Yoshida, Shinichi Kiso, Norifumi Kawada, Tetsuo Takehara and Eiji Miyoshi
  • 学会等名: The 64th Annual Meeting of the American Association for the Study of Liver Diseases
  • 発表場所: Walter E. Washington Convention Center, Washington DC, USA
  • 年月日: 20131101-20131105
• [学会発表] 急性肝不全の病態形成におけるGab1の意義：治療標的としての可能性について (2013)
  • 著者名/発表者名: 古田訓丸、吉田雄一、竹原徹郎
  • 学会等名: 第17回日本肝臓学会大会
  • 発表場所: 品川プリンスホテル（東京）
  • 年月日: 20131009-20131012
• [学会発表] 肝細胞癌におけるFoxM1転写因子の発現意義：予後規定分子マーカーとしての可能性について (2013)
  • 著者名/発表者名: 吉田雄一 、柄川真弓 、木曽真一 、木津 崇 、古田訓丸 、茶谷徳啓 、濱野美奈 、江崎久男、鎌田佳宏、友國 晃 、永野浩昭 、土岐祐一郎 、森 正樹 、竹原徹郎
  • 学会等名: 第49回日本肝臓学会総会
  • 発表場所: 京王プラザホテル（東京）
  • 年月日: 20130606-20130607
• [学会発表] 急性肝不全における肝細胞アダプター蛋白質Gab1の役割 (2013)
  • 著者名/発表者名: 古田訓丸、吉田雄一、木津崇、柄川真弓、茶谷徳啓、濱野美奈、江崎久男、鎌田佳宏、木曽真一、竹原徹郎
  • 学会等名: 第49回日本肝臓学会総会
  • 発表場所: 京王プラザホテル（東京）
  • 年月日: 20130606-20130607
• [学会発表] 肝細胞のアダプター蛋白質Gab1は、胆汁うっ滞に伴う肝線維化に対して保護的に働く：炎症性ケモカインCCL５の関与 (2013)
  • 著者名/発表者名: 木津 崇、吉田雄一、古田訓丸、柄川真弓、茶谷徳啓、濱野美奈、江崎久男、鎌田佳宏、木曽真一、竹原徹郎
  • 学会等名: 第49回日本肝臓学会総会
  • 発表場所: 京王プラザホテル（東京）
  • 年月日: 20130606-20130607