マクロファージのＣＯＸ－２を介したＰＰＡＲ活性化機序と動脈硬化抑制効果の解析

2013 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 23591337
• 研究機関: 愛媛大学
• 研究代表者: 吉永 佳代 (竹田 佳代) 愛媛大学, 医学部附属病院, 助教 (10537088)
• 研究分担者: 荒木 栄一 熊本大学, 大学院生命科学研究部, 教授 (10253733) ; 松村 剛 熊本大学, 医学部附属病院, 講師 (20398192) ; 石井 規夫 熊本大学, 医学部附属病院, 医員 (10599111)
• キーワード: 脂質代謝異常

研究概要

1)マクロファージ特異的COX-2-Tg-apoE-KOマウスの作成（in vivo）
ヒトSR-Aプロモーターをその上流に持つ発現ベクターを用い、そのプロモーター部位の下流にヒトCOX-2遺伝子を組み込んだ発現ベクター（pSR-A-COX-2）を構築したうえで、マクロファージ特異的COX-2-Tgマウスの作成を申請者の所属する大学の専門施設（熊本大学　生命資源研究・支援センター　動物資源開発研究部門）に依頼した。得られたキメラマウスの尾部より回収したDNAを鋳型とし、ヒトSR-AプロモーターとヒトCOX-2遺伝子に相同するプライマーを数種作成、これらプライマーを用いて導入遺伝子の存在をPCRで確認したところ、全てのラインで目的とするbase pairの複製DNAを確認できたが、negative controlに用いたC57/bl6マウスのDNAからも同様の複製DNAが得られたため、プライマーペアの数を増やし、再度確認を行った。しかし20種以上の組み合わせを施行したが、やはりnegative controlでのDNA複製が全てのプライマーペアで確認されたため、マクロファージ特異的COX-2-Tg-apoE-KOマウスの作成が確認できていない。鋳型となるDNAのコンタミネーションではないことは確認できたが、特異性の確認ができていないことから、現在得られた複製DNAのシークエンスを行い、複製DNAの特異性を確認中である。またPCRでの確認作業を断念し、サザンブロットでの確認を行うための、特異的プローブの作成中である。

研究成果

• [雑誌論文] Apocynin suppresses the progression of atherosclerosis in apoE-deficient mice by inactivation of macrophages. (2013)
  • 著者名/発表者名: Kinoshita H, Matsumura T, Ishii N, Fukuda K, Senokuchi T, Motoshima H, Kondo T, Taketa K, Kawasaki S, Hanatani S, Takeya M, Nishikawa T, Araki E.
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun 巻: 431 ページ: 124-130
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2013.01.014.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Evaluation of a new device for measurement of hemoglobin A1c for Japanese subjects. (2013)
  • 著者名/発表者名: Shimoda S, Maeda T, Furukawa N, Ichinose K, Taketa K, Igata M, Senokuchi T, Matsumura T, Araki E
  • 雑誌名: Diabetol Int 巻: 4 ページ: 112-116
  • DOI: 10.1007/s13340-013-0141-z
  • 査読あり
• [雑誌論文] Association between circulating leukocyte subtype counts and carotid intima-media thickness in Japanese subjects with type 2 diabetes. (2013)
  • 著者名/発表者名: Matsumura T, Taketa K, Motoshima H, Senokuchi T, Ishii N, Kinoshita H, Fukuda K, Yamada S, Kukidome D, Kondo T, Hisada A, Katoh T, Shimoda S, Nishikawa T, Araki E.
  • 雑誌名: Cardiovasc Diabetol 巻: 12 ページ: 177
  • DOI: 10.1186/1475-2840-12-160
  • 査読あり