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2012 年度 実施状況報告書

血小板アポトーシス反応の生理的役割と臨床的意義

研究課題

研究課題/領域番号 23591420
研究機関愛媛大学

研究代表者

羽藤 高明  愛媛大学, 医学部附属病院, 准教授 (30172943)

研究分担者 安川 正貴  愛媛大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (60127917)
山之内 純  愛媛大学, 医学部附属病院, 講師 (10423451)
キーワード血小板 / アポトーシス / 骨髄異形成症候群
研究概要

私どもは血小板アポトーシス制御因子であるBak/Bcl-XL系の異常によって血小板数の異常をきたす疾患があるのではないかと考え、骨髄異形成症候群(MDS)患者を対象にBakおよびBcl-XL遺伝子の塩基配列解析を行った。36名のMDS患者からDNAを抽出してBakおよびBcl-XL遺伝子配列を決定したところ、Bak遺伝子には既知のsingle nucleotide polymorphism(SNP)以外には異常を認めなかったが、Bcl-XL遺伝子にはT69P, S72T, S74T, G147C, E153Dの5つの異常を認めた。そこで、これらの異常がアポトーシス異常に関連しているのかどうかを明らかにするために各遺伝子変異を導入したpcDNA3発現ベクターを作成し、ヒト細胞であるT293細胞で発現させて、Annexin Vなどのアポトーシスマーカーの変化と細胞増殖を観察した。その結果、これらの遺伝子変異の導入によってアポトーシスは誘導されなかった。BcL-XL遺伝子は抗アポトーシス因子であり、Bcl-XLの機能不全はアポトーシスが亢進して血小板寿命を短縮させることが予想され、MDSによる血小板減少の一因になっているかもしれないと考えられるので、引き続き、MDS患者での遺伝子異常を検索していくことにしている。一方、Bcl-XLの機能亢進またはBak遺伝子機能不全はアポトーシス防止に働いて血小板数増加を将来する可能性が考えられるので、本態性血小板血症の患者においてもBakおよびBcl-XL遺伝子配列の検討を行っている。本態性血小板血症の約半数はJAK2遺伝子変異が原因であることが判明しているので、JAK2変異陰性の患者を対象に検討を進めることとした。現在までにJAK2陰性であることを確認した6名の本態性血小板血症患者についてBakおよびBcl-XL遺伝子配列の決定を行っている。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

私どもは血小板アポトーシス制御因子であるBak/Bcl-XL系の異常によって血小板数の異常をきたす疾患があるのではないかと考え、骨髄異形成症候群(MDS)患者を対象にBakおよびBcl-XL遺伝子の塩基配列解析を行った。36名のMDS患者からDNAを抽出してBakおよびBcl-XL遺伝子配列を決定したところ、Bak遺伝子には既知のsingle nucleotide polymorphism(SNP)以外には異常を認めなかったが、Bcl-XL遺伝子にはT69P, S72T, S74T, G147C, E153Dの5つの異常を認めた。そこで、これらの異常がアポトーシス異常に関連しているのかどうかを明らかにするために各遺伝子変異を導入したpcDNA3発現ベクターを作成し、ヒト細胞であるT293細胞で発現させて、アポトーシスマーカーを観察したが、現段階ではアポトーシスを誘導する遺伝子異常は見つかっていない。一方、Bcl-XLの機能亢進またはBak遺伝子機能不全はアポトーシス防止に働いて血小板数増加を将来する可能性が考えられるので、本態性血小板血症の患者においてBakおよびBcl-XL遺伝子配列の検討も行っている。本態性血小板血症の約半数はJAK2遺伝子変異が原因であることが判明しているので、JAK2変異陰性を確認した6名の患者を対象に検討を進めている。当初の計画において、これら血小板数異常患者の遺伝子解析を進め、異常が見つかれば蛋白発現実験で確認することにしていたが、幸いにも遺伝子異常のある患者が見出され、解析を進めることができた。しかしながら、アポトーシスを誘導した遺伝子異常を同定することはまだできていない。引き続き、遺伝子解析を継続し、発現実験で確認して行く予定である。

今後の研究の推進方策

引き続き、骨髄異形成症候群および本態性血小板血症患者のBakおよびBcl-XL遺伝子解析を進めていく。また、トロンビンなどで活性化された血小板とアポトーシスに陥った血小板との生化学的差異についても検討を進めていく。

次年度の研究費の使用計画

遺伝子解析および培養細胞系を用いた変異蛋白発現実験を行う予定である。また、これらの成果を学会で報告することを予定している。

  • 研究成果

    (7件)

すべて 2013 2012

すべて 雑誌論文 (4件) (うち査読あり 3件) 学会発表 (3件)

  • [雑誌論文] Novel causative and neutral mutations in a patient with protein C deficiency2013

    • 著者名/発表者名
      Yamanouchi J et al.
    • 雑誌名

      Thrombosis Research

      巻: in press ページ: in press

    • DOI

      doi:pii: S0049-3848(13)00026-1. 10.1016/j.thromres.2013.01.021.

    • 査読あり
  • [雑誌論文] rituximabを投与した難治性血栓性血小板減少性紫斑病の3症例2013

    • 著者名/発表者名
      山之内 純、他
    • 雑誌名

      臨床血液

      巻: 54 ページ: 205-209

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Role of activation-induced cytidine deaminase in the progression of follicular lymphoma2012

    • 著者名/発表者名
      Shikata H et al.
    • 雑誌名

      Cancer Science

      巻: 103 ページ: 415-421

    • DOI

      doi: 10.1111/j.1349-7006.

    • 査読あり
  • [雑誌論文] 抗血小板薬モニター検査の臨床的意義2012

    • 著者名/発表者名
      羽藤高明
    • 雑誌名

      日本血栓止血学会雑誌23:352-357, 2012.

      巻: 23 ページ: 352-357

  • [学会発表] Identification of causative and neutral mutations in a apatient with Protein C deficiency2012

    • 著者名/発表者名
      Yamanouchi J et al.
    • 学会等名
      第74回日本血液学会学術集会
    • 発表場所
      京都
    • 年月日
      20121019-20121021
  • [学会発表] 再発Indolentリンパ腫に対するBendamustine使用例の検討2012

    • 著者名/発表者名
      薬師神芳洋、他
    • 学会等名
      第74回日本血液学会学術集会
    • 発表場所
      京都
    • 年月日
      20121019-20121021
  • [学会発表] VASPリン酸化を指標にした抗血小板薬シロスタゾールの簡便なモニタリング法の確立2012

    • 著者名/発表者名
      山之内 純、他
    • 学会等名
      第34回日本血栓止血学会学術集会
    • 発表場所
      東京
    • 年月日
      20120607-20120609

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公開日: 2014-07-24  

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