リコンビントニックβ２グリコプロテイン１ドメインＶを用いた血栓症治療の可能性

2013 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 23591431
• 研究機関: 北海道大学
• 研究代表者: 保田 晋助 北海道大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (00374231)
• キーワード: 血管新生 / アンギオスタチン / β2-グリコプロテインI / 抗リン脂質抗体症候群

研究概要

β2-グリコプロテインI(β2GPI)は5つのドメインからなる糖タンパクで、抗リン脂質抗体症候群における自己抗原である。我々は、β2GPIがプラスミンによって限定分解を受けたニックβ 2GPIが血管新生抑制物質であるアンジオスタチン (AS) に結合 、その作用を阻害する事を報告した (Nakagawa et al., Blood 2009)。一方で, β2GPIにはドメインIを介したVEGF依存性の血管新生抑制作用が報告されている。本研究ではニックβ2GPIドメインVを作製し、AS存在下で血管新生効果が得られるかどうかを検討することを目的とした。
これまでに、リコンビナントβ2GPIドメインVをまずはほ乳類細胞株を用いて作製した。インタクト・ニックβ2GPIドメインVを用いて、分子間相互作用解析によりアンジオスタチンとの結合試験を行い、ニックβ2GPIドメインVがASに対して用量依存性に結合することを示した(KA 1.89-4.61e7 (1/M), KD 2.17-5.28e-8 (M))。
得られたニックβ2GPIドメインVが血管新生に及ぼす影響に関して、ヒト臍帯静脈血管内皮細胞(HUVEC)を用いた増殖アッセイの結果、ニックβ2GPIドメインVは軽度の増殖抑制能効果を有した。インタクトβ2GPIドメインVも弱い増殖抑制能を示した。
大量の蛋白を得るために大腸菌を用いた発現系に切り替えて作製したが、LPSを感度以下まで除去することが困難であった。
今後は発現効率が良くLPS混入が少ない昆虫細胞の系を用いてリコンビナントβ2GPIドメインVを作製し、ASとの相互作用による血管新生への影響を in vitro, in vivo で検証する。インタクト・ニックβ2GPIドメインVとも血管新生を抑制することは我々の予想に反しており、ドメインIの機能検証も必要である。

研究成果

• [雑誌論文] The effect of tacrolimus in patients with interstitial lung diseases complicated with polymyositis or dermatomyositis (2014)
  • 著者名/発表者名: Kurita T, Yasuda S, Oba K, Odani T, Kono M, Otomo K, Fujieda Y, Oku K, Bohgaki T, Amenguak O, Horita T, Atsumi T
  • 雑誌名: Rheumatology (Oxford) 巻: (in press)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Decreased expression of Runx1 and lowered production of Foxp3+ CD25+ CD4+ regulatory T cells in systemic sclerosis (2014)
  • 著者名/発表者名: Kataoka H, Yasuda S, Fukaya S, Oku K, Horita T, Atsumi T, Koike T
  • 雑誌名: Modern Rheumatology 巻: 未定 ページ: 未定
  • 査読あり
• [雑誌論文] Comparative analysis of different enzyme immunoassays for assessment of phosphatidylserine-dependent antiphospholipid antibodies (2014)
  • 著者名/発表者名: Amengual O, Horita T, Binder W, Norman GL, Shums Z, Kato M, Otomo K, Fujieda Y, Oku K, Bohgaki T, Yasuda S, Atsumi T
  • 雑誌名: Rheumatology International 巻: 未定 ページ: 未定
  • 査読あり
• [雑誌論文] A comparison of incidence and risk factors for serious adverse events in rheumatoid arthritis patients with etanercept or adalimumab in Korea and Japan (2014)
  • 著者名/発表者名: Cho SK, Sakai R, Nanki T, Koike R, Watanabe K, Yamazaki H, Nagasawa H, Tanaka Y, Nakajima A, Yasuda S, Ihata A, Ezawa K, Won S, Choi CB, Sung YK, Kim TH, Jun JB, Yoo DH, Miyasaka N, Bae SC, Harigai M
  • 雑誌名: Modern Rheumatology 巻: 未定 ページ: 未定
  • 査読あり
• [雑誌論文] Autoantibodies to IgG/HLA class II complexes are associated with rheumatoid arthritis susceptibility (2014)
  • 著者名/発表者名: Jin H, Arase N, Hirayasu K, Kohyama M, Suenaga T, Saito F, Tanimura K, Matsuoka S, Ebina K, Shi K, Toyama-Sorimachi N, Yasuda S, Horita T, Hiwa R, Takasugi K, Ohmura K, Yoshikawa H, Saito T, Atsumi T, Sasazuki T, Katayama I, Lanier LL, Arase H
  • 雑誌名: Proceedings of National Academy of Science USA 巻: 111 ページ: 3787-3792
  • DOI: 10.1073/pnas.1401105111
  • 査読あり
• [雑誌論文] Essential role of p38 mitogen-activated protein kinase pathway in tissue factor gene expression mediated by the phosphatidylserina-dependent antiprothrombin antibody (2013)
  • 著者名/発表者名: Oku K, Amengual O, Zigon P, Horita T, Yasuda S, Atsumi T
  • 雑誌名: Rheumatology (Oxford) 巻: 52(10) ページ: 1775-84
  • 査読あり
• [雑誌論文] The involvement of CD36 in monocyte activation by antiphospholipid antibodies (2013)
  • 著者名/発表者名: Kato M, Atsumi T, Oku K, Amengual O, Nakagawa H, Fujieda Y, Otomo K, Horita T, Yasuda S, Koike T
  • 雑誌名: Lupus 巻: 22(8) ページ: 761-71
  • 査読あり
• [学会発表] 強皮症に対する造血幹細胞移植 (2014)
  • 著者名/発表者名: 保田晋助
  • 学会等名: 第58回日本リウマチ学会総会・学術集会
  • 発表場所: グランドプリンスホテル新高輪（東京都）
  • 年月日: 20140424-20140426
• [学会発表] Diagnosis and treatment of RA in Japan (2013)
  • 著者名/発表者名: Yasuda S
  • 学会等名: The 6th Rheumatology Meeting in Aubrac
  • 発表場所: ベストウエスタンラギオール、オーブラック（フランス）
  • 年月日: 20130611-20130612
  • 招待講演
• [学会発表] 関節リウマチにおけるRasGRP4の発現異常 (2013)
  • 著者名/発表者名: 保田晋助
  • 学会等名: 第57回日本リウマチ学会総会・学術集会
  • 発表場所: 京都国際会議場（京都市）
  • 年月日: 20130418-20130420
• [学会発表] Role of β2-glycoprotein I Domain V in Angiogenesis (2013)
  • 著者名/発表者名: Yasuda S, Kubota A, Nakagawa H, Kuroki K, Fujieda Y, Bohgaki T, Amengual O, Horita T, Maenaka K, Atsumi T
  • 学会等名: CORA meeting
  • 発表場所: ノボテルブダペストシティ、ブダペスト（ハンガリー）
  • 年月日: 20130404-20130406
• [備考] 北海道大学大学院医学研究科 内科学講座 免疫・代謝内科学分野
  • URL: http://www.hucc.hokudai.ac.jp/