2011 年度実施状況報告書

カンナビノイドによる炎症抑制作用の解明と関節リウマチの新規治療開発

研究課題

研究課題/領域番号	23591435
研究機関	東京医科歯科大学
研究代表者	南木敏宏東京医科歯科大学, 医歯(薬)学総合研究科, 寄附講座教員 (00282749)
研究分担者	宮坂信之東京医科歯科大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (30157622)
研究期間 (年度)	2011-04-28 – 2014-03-31
キーワード	カンナビノイド / 関節リウマチ
研究概要	カンナビノイド(CB: cannabinoid)は大麻の主成分であるが、その受容体であるCB1は主に中枢神経系に、CB2は免疫系細胞に発現しているため、CB2特異的リガンドは中枢神経への作用がなく、免疫系へ作用することが推測される。内在性のCBは近年免疫系への関与が注目されている脂質メディエーターである。本研究では、関節リウマチ(RA)におけるCBの治療への有用性とその機序を検討した。　RA滑膜組織でのCB2発現を免疫染色にて解析した。CB2はRA滑膜組織において、変形性関節症と比較し発現の亢進がみられた。蛍光二重染色ではCD68陽性マクロファージ、CD4陽性Tリンパ球、CD21陽性Bリンパ球、vimentin陽性線維芽細胞様滑膜細胞にCB2との共染性を認めた。RA滑膜組織において、CB2はこれらの細胞に発現していることが見出された。　CB2選択的アゴニストであるJWH133をコラーゲン関節炎(CIA)マウスに投与し、関節炎抑制効果を解析した。CIAマウスにJWH133を関節炎発症前より投与したところ、関節炎スコア、滑膜組織への炎症細胞浸潤、骨破壊の程度が有意に抑制された。さらに、関節炎発症後からのJWH133の投与においても関節炎スコアの抑制効果を認めた。　これらの結果より、CB2選択的アゴニストは、RA滑膜のマクロファージ、T細胞、B細胞、線維芽細胞様滑膜細胞に働き、関節炎抑制効果がある可能性が示唆された。
現在までの達成度 (区分)	現在までの達成度 (区分) 2: おおむね順調に進展している理由申請書に記載した、当該年度の研究予定に関して、概ね予定通りに研究を進めることができ、研究実績の概要に記載したように良好な結果が得られている。
今後の研究の推進方策	CB2選択的アゴニストにより、マウス関節炎の抑制効果を認めた。その効果の機序を検討するため、in vitroにおいて、関節炎の病態に深く関与する、マクロファージ、T細胞、B細胞、線維芽細胞様滑膜細胞に対するCB2選択的アゴニストの炎症抑制効果を解析する。(1)マクロファージ：CB2アゴニストの破骨細胞分化･活性化への影響を解析する。末梢血単球を単離し、M-CSFおよびRANKL刺激により破骨細胞への分化が誘導できるが、その際にCB2アゴニストを投与する。分化した破骨細胞数を計測し破骨細胞分化への影響を観察する。また一旦破骨細胞に分化した細胞に、CB2リガンドを投与し、破骨細胞活性化への影響を破骨能の解析により評価する。(2)T細胞：RA患者末梢血よりT細胞を単離し、抗CD3, CD28抗体で刺激し、同時にCB2アゴニストを投与する。T細胞の細胞増殖、IFN-γ, IL-17などの炎症性サイトカイン産生、CD40Lなどの活性化分子の発現に対する抑制効果を観察する。(3)B細胞：RA末梢血よりB細胞を単離。抗イムノグロブリン抗体で刺激し、B細胞増殖、IL-6, TNF産生、ICOSL, BAFF-Rなどの発現に対するCB2アゴニストによる抑制効果を検討する。(4)RA線維芽細胞様滑膜細胞：RA滑膜より樹立した線維芽細胞様滑膜細胞を、TNFなどの炎症性サイトカインによる刺激時に、CB2特異的アゴニストを投与し、細胞増殖、炎症に関与するサイトカイン/ケモカイン、組織破壊に関与する分子(IL-6, MCP-1, SDF-1, fractalkine、MMP-3など)の産生抑制効果を解析する。
次年度の研究費の使用計画	研究試薬(細胞培養試薬、抗体、ガラス器具)、およびマウス購入費用など動物実験費に用いる。