新規モノクローナル抗体を用いて分離した血液循環メラノーマ細胞の遺伝子解析

2013 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 23591616
• 研究機関: 信州大学
• 研究代表者: 芦田 敦子 信州大学, 医学部, 助教 (00596786)
• 研究分担者: 後藤 康文 信州大学, 医学部, 非常勤講師 (60467181) ; 奥山 隆平 信州大学, 医学部, 教授 (80292332)
• キーワード: 血液循環腫瘍細胞 / メラノーマ

研究概要

我々はメラノーマ患者において、血液循環腫瘍細胞 (Circulating　tumor cells: CTCs)を用いて遺伝子変異を解析するシステムの構築をはかってきた。CTCsによる遺伝子解析を行うことで、（１）リアルタイムで体内の腫瘍細胞の状態がわかる、（２）侵襲の少ない採血で摂取できる、（３）経時的なモニタリングが可能、という利点があり、患者の予後や再発などを予測できる有用なバイオマーカーとして期待されている。我々はこれまでは患者の末梢血中から有核細胞を分離し、そこにHMW-MAA(Anti-High moleculr Weight-Melanoma Associate Antigen)抗体を標識し、マグネットビーズを用いてメラノーマ細胞のみを分離し、CTCsについてBRAFやKITなどの遺伝子解析を行っていた。CTCsは病期が進行すれば末梢血に多数出現するため採取しやすいが、病初期の段階はCTCsを分離する効率が大変低いという問題点がある。B7はＴ細胞共刺激因子の一つであり、細胞性免疫には欠かせない分子の１つであるが、そのホモログであるB7-H3は転移性メラノーマに高率に発現していることが報告されている。この抗体を利用してCTCsの採取効率を上げることにより、CTCsのバイオマーカーとしての有用性がより高まると考えられる。B7-H3抗体の併用による回収率の評価をマグネットビーズ法とFACS法で検討した。
（１）マグネットビーズ法での回収率の比較では、888melでは差が見られなかったが、928melとMMG1においては、HMW-MAA抗体単独よりもB7-H3抗体を組み合わせた方が回収率が2から4倍高くなった。
（２）FACS法での回収率の比較では、HMW-MAA抗体単独よりもB7-H3抗体単独や両者の併用の方が腫瘍細胞の検出率が高かった。

研究成果

• [雑誌論文] 5-hydroxymethylcytosine as a useful marker to differentiate between malignant melanomas and benign melanocytic nevi (2014)
  • 著者名/発表者名: Uchiyama R, Uhara H, Uchiyama A, Ogawa E, Takazawa Y, Ashida A, Koga H, Hayashi K, Kiniwa Y, Okuyama R
  • 雑誌名: J Dermatol Sci 巻: 73 ページ: 161-163
  • 査読あり
• [雑誌論文] Combination chemotherapy of carboplatin and paclitaxel for metastatic melanoma (2013)
  • 著者名/発表者名: Sato Y, Uhara H, Ashida A, Okuyama R
  • 雑誌名: J Dermatol 巻: 40 ページ: 1050-1051
  • 査読あり
• [雑誌論文] NRAS mutations in primary and metastatic melanomas of Japanese patients (2013)
  • 著者名/発表者名: Uhara H, Ashida A, Koga H, Uchiyama A, Uchiyama R, Hayashi K, Kiniwa Y, Okuyama R
  • 雑誌名: Int J Clin Oncol 巻: - ページ: -
  • DOI: 10.1007/s10147-013-0573-2
  • 査読あり
• [雑誌論文] チロシンキナーゼ：KIT (2013)
  • 著者名/発表者名: 芦田敦子、木庭幸子、宇原久、奥山隆平
  • 雑誌名: 日本臨床 巻: 増刊号4 ページ: 134-138
  • DOI: -
• [雑誌論文] MAPキナーゼ：NRAS、BRAF、MEK (2013)
  • 著者名/発表者名: 芦田敦子、木庭幸子、宇原久、奥山隆平
  • 雑誌名: MAPキナーゼ：NRAS、BRAF、MEK 巻: 増刊号4 ページ: 126-129
  • DOI: -
• [学会発表] Assessment of NRAS mutation in Japanese melanoma patients (2013)
  • 著者名/発表者名: Ashida A, Uhara H, Okuyama R
  • 学会等名: The 72th Annual Meeting of the Japanese Cancer Association
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 20131003-20131005
• [学会発表] 日本人のメラノーマ患者におけるBRAF、NRAS、KITの遺伝子変異の解析 (2013)
  • 著者名/発表者名: 芦田敦子、宇原久、奥山隆平
  • 学会等名: 日本皮膚悪性腫瘍学会
  • 発表場所: 甲府
  • 年月日: 20130809-10
• [図書] 皮膚科臨床アセット 分子標的薬 KITの変異に基づく治療薬 (2014)
  • 著者名/発表者名: 芦田敦子、奥山隆平
  • 総ページ数: 印刷中
  • 出版者: 中山書店