| 研究課題/領域番号 |
23591910
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| 研究機関 | 藤田保健衛生大学 |
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研究代表者 |
日比 八束 藤田保健衛生大学, 医学部, 准教授 (10399024)
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| 研究分担者 |
水野 豊 藤田保健衛生大学, 医学部, 講師 (90595977)
岩瀬 克己 藤田保健衛生大学, 医学部, 教授 (70148261)
今井 常夫 名古屋大学, 医学部附属病院, 講師 (80252245)
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| 研究期間 (年度) |
2011-04-28 – 2014-03-31
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| キーワード | 上皮小体 / PKA / 線腫 / 上皮小体機能亢進症 |
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| 研究概要 |
「研究の目的」、「研究実施計画」に基づき平成23年度の下記研究はほぼ順調に遂行した。1. 原発性上皮小体機能亢進症における腺腫で PRKAR1α 遺伝子が過剰発現していることを手術凍結標本から RNA を抽出しノザンブロット法を用いて解析する。2. 同様に蛋白を抽出しウェスタンブロット法を用いて蛋白レベルでの発現を検討する。また PKA 活性を正常腺と腺腫でそれぞれ測定し比較する。以上研究実施計画に記載したが、海外学会への参加が出来ず情報収集に遅れている。情報収集を平成24年度の課題にし、平成23年度の研究の成果を積極的に発表するとともにさらなる情報収集をする。上記、1.2についての実験はおおよそ順調に進んでおり、平成23年度の研究を基にして、更に下記3.4.5の研究を進める。3. 手術病理未染プレパラートを用いて各種PKA subunit 抗体および抗PCNA抗体を用いて二重免疫染色を施行しそれらの関連について評価する。4. 培養細胞にフォルスコリンで cAMP/PKA シグナリングを外的に刺激したのち培養した細胞から蛋白を抽出し、抗リン酸化Bcl-2抗体を用いてウェスタンブロット法で Bcl-2 蛋白のリン酸化の状況につき検討する。5. 別のプレートで処理した培養細胞では WST アッセイおよびフローサイトメトリにて解析し細胞の生存率およびアポトーシスにつき検討する。検体数の不足という難点もあるがこの件については共同研究者と共に考えていかなければならない。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
実験は順調であるが、検体数の不足と情報収集不足。
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| 今後の研究の推進方策 |
平成23年度同様、検体収集に努める。海外学会、国内学会に積極的に参加し、平成23年度の研究の成果を発表するとともにさらなる情報収集をする。検体の更なる収集。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
海外学会、国内学会に積極的に参加し、平成23年度の研究の成果を発表するとともにさらなる情報収集をする。・手術病理未染プレパラートを用いて各種 PKA subunit 抗体および抗PCNA抗体を用いて二重免疫染色を施行しそれらの関連について評価する。・培養細胞にフォルスコリンで cAMP/PKA シグナリングを外的に刺激したのち培養した細胞から蛋白を抽出し、抗リン酸化Bcl-2抗体を用いてウェスタンブロット法で Bcl-2 蛋白のリン酸化の状況につき検討する。・別のプレートで処理した培養細胞では WST アッセイおよびフローサイトメトリにて解析し細胞の生存率およびアポトーシスにつき検討する。
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