| 研究課題/領域番号 |
23592010
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| 研究機関 | 徳島大学 |
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研究代表者 |
岩田 貴 徳島大学, ヘルスバイオサイエンス研究部, 准教授 (00380022)
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| 研究分担者 |
島田 光生 徳島大学, ヘルスバイオサイエンス研究部, 教授 (10216070)
宇都宮 徹 徳島大学, ヘルスバイオサイエンス研究部, 准教授 (30304801)
栗田 信浩 徳島大学, 大学病院, 特任教授 (30335814)
西岡 将規 徳島大学, 大学病院, 助教 (50398020)
池本 哲也 徳島大学, ヘルスバイオサイエンス研究部, 助教 (20398019)
森本 慎也 徳島大学, 大学病院, 助教 (00548745)
吉川 幸造 徳島大学, ヘルスバイオサイエンス研究部, 助教 (80448331)
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| キーワード | 膵島移植 / 拒絶反応 / 脂肪由来幹細胞（ADSC） / 調節性T細胞 Treg / helper T細胞 / suppressor T細胞 / 免疫寛容 / OP9DL1細胞 |
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| 研究概要 |
【目的】膵島移植における拒絶反応を軽減させることを目指し、拒絶反応下に同時移植された脂肪組織由来幹細胞（ADSC）がreg T細胞となり、移植片のステルス化を促進させるのか、helper-T細胞やsuppressor-T細胞に分化し免疫寛容を起こすなど形態的、免疫学的変化や、サイトカインなどのメディエーターとADSCの関連に注目して研究を行う。
【方法】（実験1）ヒトADSC2×107個をDMEM＋10％FBS＋100 U/ml Penicillin G,＋100 mg/ml Streptomycin培地に浮遊させ、OP9-DL1ストローマ細胞と共培養する。共培養後5、7、14日目に細胞を採取し、検討する。（実験2）Balb/cマウス由来の膵島100個をSTZ誘導糖尿病C57BL/6マウスの腎被膜下に移植する拒絶反応モデルにヒトADSC100個、実験1で分化したADSC100個を腎被膜下に同時移植する。
(検討項目)1) ADSCの変化（CD34+CD38+でFACS-scan検討）、2) Treg細胞の分化、生存に必要な因子（Foxp3, IL-2, TGF-β, VEGFのmRNAをPCRで検討）、3) Notch関連因子（抗Delta1,3,4、Jagged1,2 抗体で免染）を検討する。
【結果】これまでに共培養実験を3回行い、contaminationにより再実験の時間を要したが、4回目で共培養に成功し、現在共培養後ヒトADSCの免疫細胞関連の表面マーカーの解析を行っている。また、Balb/cマウス由来の膵島をSTZ誘導糖尿病C57BL/6マウスに移植する拒絶反応モデルの作成は成功し、手技は安定している。
【結論】今後、マウス膵島移植拒絶反応モデルにヒトADSCおよび共培養後ADSCを移植し、標本におけるADSCの変化について検討し免疫寛容メカニズムを追究する予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
マウス膵島移植拒絶反応モデルにおけるマウス膵島分離および移植手技については習得、安定している。これまでにヒトADSCをマウスOP9DL1ストローマ細胞と共培養し、免疫細胞関連表面マーカーの解析を行っている。拒絶反応モデル作成の完成および、ヒトADSCのマウスOP9DL1との共培養の終了という点で達成度としてはおおむね順調に進展している。平成25年度は当初の予定通り、マウス膵島移植拒絶反応モデルにヒトADSCおよびマウスOP9DL1との共培養後のT前駆細胞分化ADSCを移植し免疫寛容メカニズムを追究していく。そのために必要なマウス、CD4, 8, 39, 45などT細胞表面マーカーを購入する。
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| 今後の研究の推進方策 |
平成25年度は平成24年度に行ったヒトADSC共培養下T前駆細胞分化実験を発展させて追究するとともに、マウス膵島異種移植（拒絶反応）モデルにヒトADSCを同時移植、T前駆細胞へ分化したADSCを移植し、検討項目に挙げた拒絶反応の有無やヒトADSCの変化のほか、マスト細胞数およびIL-9などのサイトカインの変化や分化促進因子、Notch関連因子を検討し、ADRCのin vivoでのreg T細胞への分化のメカニズムを解明する予定である。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
平成24年度はマウス膵島移植拒絶反応モデルの作成を行い、移植手技については習得、安定した。平成25年度はマウス膵島移植拒絶反応モデルにヒトADSC移植実験およびマウスOP9DL1ストローマ細胞共培養ヒトADSCをマウス膵島移植拒絶反応モデルに移植する実験を行う。次年度への繰越額は前述の実験で必要な消耗品に使用する予定である。
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