| 研究課題/領域番号 |
23592121
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
北条 雅人 京都大学, 医学(系)研究科(研究院), その他 (60372588)
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| 研究分担者 |
影山 龍一郎 京都大学, ウイルス研究所, 教授 (80224369)
宮本 享 京都大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (70239440)
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| 研究期間 (年度) |
2011-04-28 – 2016-03-31
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| キーワード | 下垂体 / Hes1 / Hes5 / Math3 / NeuroD / Mash1 |
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| 研究実績の概要 |
申請者らは、下垂体の発生においてNotch-Hes経路が幹細胞の分化を制御していることを証明し報告してきた。下垂体機能低下症が特定疾患に指定され、下垂体の再生医療開発への期待は高まっている。本研究では、引き続き下垂体における幹細胞の制御機構の解析を続け、さらに胚性幹細胞(ES細胞)あるいはiPS細胞から下垂体ホルモン産生細胞への分化誘導法を確立することを目的とする。さらに、移植治療を念頭において、骨髄間葉系幹細胞から下垂体ホルモン産生細胞への分化誘導法を開発することが最終的な研究目的である。
昨年度までに、Hes1,Hes5のダブルノックアウトマウスを作成し、神経性下垂体（下垂体後葉）を中心に解析した。また、Hesの下流因子であるNeuroD, Mash1, Math3の各組み合わせでのダブルノックアウトマウス、およびトリプルノックアウトマウスを作成した。これらのマウスの胎児の下垂体を解析した。今年度から、これらの胎児の下垂体をさらに解析していく予定である。
さらに、今年度、幹細胞を用いた研究として、マウス骨髄間葉系幹細胞からの分化実験の環境を整え、分化誘導を開始する予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
26年度までに、マウス骨髄間葉系細胞での実験予定であったが、ノックアウトマウスに関する研究に時間を割かれ、遅れが生じた。
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| 今後の研究の推進方策 |
ノックアウトマウスを用いた解析としては、以下のとおりである。Hes1の下流因子のNeuroD、Mash1、Math3に焦点をあわせた解析を行なう。かけあわせによってダブルノックアウト、トリプルノックアウトマウスを作成した。これらのノックアウトマウスのE12.5、E14.5、E17.5の胎児の下垂体の解析を行う予定である。各前葉ホルモンマーカー、Ki67などの抗体での免疫染色、BrdUの取り込み実験、TUNEL法等で解析する。さらに、ノックアウトマウスの胎児下垂体を初期培養し、解析の予定である。移植実験も行なう予定である。
ES細胞、骨髄間葉系幹細胞を用いた研究としてはHes遺伝子群を一時的にES細胞、骨髄間葉系幹細胞に強制発現させ、下垂体前駆細胞への分化誘導を図る。さらに、FACSでのソーティングによって分化の効率化を図る予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
26年度にノックアウトマウスの実験に時間を割かれたため、骨髄間葉系細胞での実験に遅れが生じたため。
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| 次年度使用額の使用計画 |
ノックアウマウスの実験は26年度までで目処がついた。次年度は、マウス骨髄間葉系細胞での実験を行なう予定である。
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