| 研究課題/領域番号 |
23592134
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| 研究機関 | 鹿児島大学 |
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研究代表者 |
永井 拓 鹿児島大学, 医歯(薬)学総合研究科, 講師 (90363647)
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| 研究分担者 |
平野 宏文 鹿児島大学, 医学部・歯学部附属病院, 講師 (00264416)
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| 研究期間 (年度) |
2011-04-28 – 2014-03-31
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| キーワード | 抗体 / マクロファージ / 癌 |
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| 研究概要 |
【背景・目的】がんの間質に局在する腫瘍関連マクロファージ(Tumor associated macrophages, TAMs)は、がんの増殖のみならず、がん免疫の抑制にも関与する事が指摘されることから、TAMsの選択的除去はがん治療に有効であることが推察される。本研究ではTAMsのマーカー候補分子である葉酸受容体β(FRβ)を標的としたイムノトキシンを作製し、動物モデル（ラットおよびマウス）にてがん免疫の増強を伴ったがん増殖の抑制効果を検討する事を目的とした。【結果】FRβ発現TAMs選択的除去に用いるイムノトキシンの作製：抗マウスFRβおよび抗ラットFRβイムノトキシンを大腸菌発現系から精製を行った。精製終了後、FRβ強制発現細胞を用いて増殖阻害活性をフローサイトメータ―にて検討した。その結果、抗マウスおよび抗ラットイムノトキシンが示す50%増殖阻害濃度は、それぞれ10ng/mL、12.5ng/mLであった。イムノトキシンのワクチンモデルにおけるがん増殖抑制効果の検討（マウスモデル）：ワクチン用細胞はマウスメラノーマ細胞(B16F10)に20Gyの放射線処理を行って作製し、C57BL6マウスの腹腔に投与した。ワクチン処理後、放射線未処理の同細胞を皮下に移植し、さらに移植4日後から4日間隔でイムノトキシン、コントロールタンパクを投与した。皮下移植後の致死率と体重を経日的に計測した。その結果、イムノトキシン群はコントロールタンパク質群に比して有意にがんの増殖を抑制した。現在、ラット神経膠腫F98細胞を用いた移植モデルならびにワクチンモデルを作製し、効果を検討中であると同時に、FRβ発現TAMsの機能解析を行っている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
概ね進展はしているものの、FRβ発現TAMsの機能解析ならびにトランスクリプトーム解析がやや遅れている。主な理由として脳および皮下移植部位における解析可能な細胞（特にリンパ球）の数量を確保できなかった事があげられる。
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| 今後の研究の推進方策 |
当該研究費が生じた状況： TAMsの機能解析ならびにトランスクリプトーム解析は平成23年度と24年度を通じて行う事を予定しているが、23年度ではその試行に至らなかった事が理由である。24年度の推進方策：1.ラット神経膠腫モデルにおけるワクチンモデルにおけるイムノトキシンの治療効果を検討する。2.ラット神経膠腫モデルおよびマウスメラノーマモデルから調整したTAMsの機能解析(リンパ球増殖、血管新生、サイトカインアレイ)を行う。なお、使用する細胞数が解析に満たない場合は同一個体内の脾臓リンパ球を用いて行う。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
動物実験について、ラット、マウス、ならびにオスモティックポンプと動物手術の消耗品試薬が必要である。また、TAMsの機能解析における遺伝子解析や機能解析における消耗品試薬が必要である。平成２３年度において未使用分は動物実験の消耗品（オスモティックポンプ、試薬）と、TAMs機能解析に必要とする抗体試薬と、消耗品試薬の購入に充てる。また、これら成果発表の為の旅費と論文印刷代が必要である。
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