| 研究課題/領域番号 |
23592195
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| 研究機関 | 鹿児島大学 |
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研究代表者 |
小宮 節郎 鹿児島大学, 医歯(薬)学総合研究科, 教授 (30178371)
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| 研究分担者 |
瀬戸口 啓夫 鹿児島大学, 医歯(薬)学総合研究科, 特任准教授 (40423727)
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| 研究期間 (年度) |
2011-04-28 – 2014-03-31
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| キーワード | GOLPH3 / GOLPH3L / 骨肉腫 |
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| 研究概要 |
我々は骨・軟部肉腫の発生・増殖・転移・細胞老化におけるGOLPH3/GOLPH3L遺伝子の機能解析を行い、ヒト骨・軟部肉腫においてGOLPH3/GOLPH3L遺伝子の強発現を確認した後にRNAiを用いてノックダウンすると、骨・軟部肉腫の増殖抑制作用を示すことを見出している。また、GOLPH3/GOLPH3L遺伝子ノックダウンによる増殖抑制には細胞老化のメカニズムが関与していることも見出した。これらを踏まえ、今回の研究ではGOLPH3/GOLPH3L遺伝子の骨・軟部肉腫における機能を詳細に解析し、細胞移動、転移のメカニズムを明らかにし、骨・軟部肉腫の新規分子標的治療法の確立に貢献する。第一報を英文誌に報告した。Role of GOLPH3 and GOLPH3L in the proliferation of human rhabdomyosarcomaKunigou O., Nagao H., Kawabata N., Ishidou Y., Nagano S., Maeda S., Komiya S., and Setoguchi T. Oncology Reports. 2011;5:1337-42
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
まずは横紋筋肉腫におけるGOLPH3/GOLPH3Lのin vitroにおける機能解析が予定通り終了した。英文誌に一報報告できたことは予定以上の成果であったと考える。論文の内容：横紋筋肉腫の増殖におけるGOLPH3/GOLPH3Lの機能の解析を行った。その結果、横紋筋肉腫の細胞株、臨床検体ともGOLPH3/GOLPH3Lm RNAの強発現を認めた。またヒト横紋筋肉腫細胞株においてGOLPH3/GOLPH3Lタンパクの発現上昇を認めた。siRNAを用いてGOLPH3/GOLPH3Lをノックダウンすると各々横紋筋肉腫の増殖抑制を生じた。さらに同時にGOLPH3/GOLPH3Lをノックダウンすると横紋筋肉腫の増殖が抑制された。これらの結果は横紋筋肉腫の増殖にGOLPH3/GOLPH3Lが重要な機能を担っており、その制御が横紋筋肉腫の治療ターゲットとなりうることを示唆している。今後はin vivoにおける機能解析を継続して行う。また骨肉腫におけるGOLPH3/GOLPH3Lの機能解析も併せて行う。
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| 今後の研究の推進方策 |
具体的にはGOLPH3/GOLPH3Lにより、発現や活性が制御される増殖因子関連遺伝子の抑制による骨軟部肉腫増殖抑制の検討。Aマイクロアレイにて同定してある、GOLPH3/GOLPH3Lをノックダウンしたときに発現・活性が変化する遺伝子をreal-time PCR, western blotを用いて確認する。B, 上記で確認した候補因子をsiRNAやshRNAでノックダウン、ノックダウンして様々な骨軟部肉腫細胞に対する増殖抑制効果をin vitroにおいてMTT assay, colony formation assayを使用して評価する。GOLPH3/GOLPH3Lにより、発現や活性が制御される増殖因子関連遺伝子の抑制による骨軟部肉腫増殖・浸潤能への影響の解析。A, 上記で確認した候補因子をsiRNAやshRNAでノックダウン、ノックダウンして様々な骨軟部肉腫細胞に対する移動・浸潤能の抑制効果をin vitroにおいて Wound healing assay, membrane assayを使用して評価する。GOLPH3/GOLPH3Lにより、発現や活性が制御される増殖因子関連遺伝子の強制発現により不死化間葉系幹細胞の増殖・浸潤能への影響の解析上記で確認した候補因子を expression vectorを用いて骨軟部肉腫の起源細胞の有力な候補である間葉系幹細胞に強制発現させる。上記で確認した候補因子の増殖・移動・浸潤能に及ぼす影響を 評価する。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
研究試薬：抗体、トランスフェクション試薬、siRNA、培養用試薬などに使用する。
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