| 研究課題/領域番号 |
23592508
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| 研究機関 | 三重大学 |
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研究代表者 |
石永 一 三重大学, 医学部附属病院, 講師 (50335121)
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| 研究期間 (年度) |
2011-04-28 – 2014-03-31
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| キーワード | ＴＧＦα / ＭＵＣ５ＡＣ / 好酸球性副鼻腔炎 |
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| 研究概要 |
手術で採取したヒト鼻粘膜組織を用い、免疫組織化学で抗TGFα抗体にて蛍光免疫染色を行い、好酸球性副鼻腔炎患者においてTGFαが発現亢進しているか調べた。結果は慢性副鼻腔炎や対照患者の鼻粘膜に比して明らかにその発現亢進を認めた。 次に、ルシフェラーゼアッセイ法を用いてにTGFα刺激によるムチン遺伝子発現亢進の有無を測定した。これはＨＭ３－ＭＵＣ５ＡＣ細胞を用いて行った。結果は明らかにＭＵＣ５ＡＣ遺伝子発現の亢進を示した。次にＡ５４９細胞を用いて定量的ＰＣＲ法にて同様な現象が得られるか調べた。結果はルシフェラーゼでの結果と同様にTGFαがＭＵＣ５ＡＣ遺伝子発現を亢進していることが判明した。 次に好酸球性副鼻腔炎では他の炎症性サイトカインも亢進していることが知られており、その一つであるＴＮＦαとTGFαとの共刺激によるＭＵＣ５ＡＣ遺伝子発現への影響も併せて調べた。結果は驚くべきことに相乗的に発現亢進させることを発見した。さらに、ＴＧＦαとＴＮＦαの共刺激によるＭＵＣ５ＡＣ遺伝子発現の機序をルシフェラーゼアッセイ法を用いて検討した。結果はＥＲＫシグナリングが深く関与していることが判明した。最後にＴＧＦαが蛋白レベルでもＥＲＫシグナルを活性化させているかも確認した。これはＥＲＫキナーゼアッセイ法を用いて行い、リン酸化がみられることを確認した。 これらの事からＴＧＦαは好酸球性副鼻腔炎にて重要な役割を果たしており、特に深く粘液過分泌に関与していることが示唆された。本研究はPharmacolocgyに投稿し、掲載された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
1: 当初の計画以上に進展している
理由
まず研究が順調に進み、第一報としてPharmacolocgyに投稿し掲載された。少なくても本研究でＴＧＦαの培養細胞系での粘液産生における役割や細胞内シグナル伝達についてある程度解明できた。以上の点から当初の計画以上に順調に進展していると考える。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後はまず好酸球性モデルマウスを作成し、ＴＧＦαの役割についてさらに検討を加えたい。 また培養細胞系の研究としては、これまではＴＧＦαがムチン遺伝子・ＭＵC5AC遺伝子発現を亢進させることは解明したが、粘膜下腺に多く分布するとされているＭＵＣ５Ｂへの関与の有無も併せて検討したい。 ＴＧＦαの細胞内の作用機序については、これまでＥＲＫシグナリングについて検討したが、他のシグナルが関与していないかも検討したい。
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| 次年度の研究費の使用計画 |
マウスモデルの作成ならびに指摘条件検討のためのセッティング費用（マウスの購入、各種試薬の購入）、培養細胞系実験のための各種試薬の購入、また研究発表の為の旅費、これは海外の学会での発表も含む、論文作成にかかる費用が必要と思われる。
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