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2012 年度 実施状況報告書

組込み接合エレメントCTnPg1による口腔内細菌間での遺伝子伝達

研究課題

研究課題/領域番号 23592704
研究機関長崎大学

研究代表者

内藤 真理子  長崎大学, 医歯(薬)学総合研究科, 准教授 (20244072)

キーワードゲノム / 転移性遺伝子 / CTn / 口腔細菌 / 歯周病
研究概要

口腔病原細菌Porphyromonas gingivalis ATCC 33277株のCTnが持つaccessory遺伝子、transporter , putative Na+ driven multidrug efflux pump (PGN0081)の変異株について薬剤感受性の影響を検討した。96穴マイクロプレートによる最少発育濃度(MIC)を6種の抗生物質(levofloxacin, norfloxacin, ciprofloxacin, puromycin, テトラサイクリン、クロラムフェニコール)、2種の薬剤(EtBr, SDS)を用いて測定した。結果2倍以上のMICの変化がみられるものはなかった。PGN0081の機能についてはさらなる検討が必要であることがあきらかになった。P. gingivalisに近縁の口腔内細菌の中からCTnPg1類似のCTnの検索を行た。Prevotella intermediaの臨床分離株1株の全genome配列を決定したところ、 CTnPg1類似のCTnを見出し、CTnPi1とした。また公開されたPrev. intermedia strain17のゲノムからも一個のCTnPg1類似のCTnが見いだされた。見出した2種のCTnはそれぞれ自身の染色体ゲノムから切り出され、環状のintermediated formを形成することを確認した。この結果からPrev. intermediaにおいてもCTnPg1類似のCTnが転移活性をもつことが示唆された。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

CTnPg1のaccessary遺伝子の変異株の薬剤感受性試験を優先して行ったので、CTnPg1転移株でのマウスへの接種による感染実験を行うことができなかった。が,H25年度に予定していた実験の一部を繰り上げて実施した。これにより本年度の実験によりP. gingivaliに近縁のPrevotella intermedia株のゲノム解析から新たに2種のCTnPg1類似のCTnを見出すことができた。またさらにこの2種が生菌中で転移活性を持つことが示唆される実験結果を得た。

今後の研究の推進方策

CTnPg1類似CTnの検索を行う。また得られたCTnPg1類似CTnを比較することにより、本CTnの転移メカニズム、また転移起点(oriT)の同定、およびoriT開裂に関わる遺伝子の検索を行う。またCTnPg1転移株のマウスでの病原性についての実験を行う。

次年度の研究費の使用計画

CTnPg1 におけるoriT検索の実施、またoriT開裂遺伝子の変異株作成に欠かせない培地類の作成と嫌気培養装置の稼働に必要なガス、キャタリスト、硫化水素吸収剤の購入を予定している。また動物での感染実験のためのマウスの購入も計画している

  • 研究成果

    (2件)

すべて 2013 2012

すべて 学会発表 (2件)

  • [学会発表] 歯周病原菌Prevotella intermedia臨床分離株OMA14の全ゲノム配列決定2013

    • 著者名/発表者名
      内藤真理子 (代表)
    • 学会等名
      第86回日本細菌学会総会
    • 発表場所
      幕張メッセ 国際会議場(千葉市)
    • 年月日
      20130318-20130320
  • [学会発表] Site-directed mutagenesis in Prevotella intermedia: genetic analysis of P. intermedia Por secretion system.2012

    • 著者名/発表者名
      Mariko Naito
    • 学会等名
      First International Conference on Porphyromonas gingivalis and Related Bacterial Species.
    • 発表場所
      長崎大学医学部 良順会館 (長崎市)
    • 年月日
      20120827-20120828

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公開日: 2014-07-24  

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