ｉＰＳ細胞を用いた唾液腺細胞分化誘導法の確立

2013 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 23592718
• 研究機関: 昭和大学
• 研究代表者: 美島 健二 昭和大学, 歯学部, 教授 (50275343)
• 研究分担者: 斎藤 一郎 鶴見大学, 歯学部, 教授 (60147634) ; 井上 裕子 日本薬科大学, 薬学部, 准教授 (50367306) ; 梁 洪淵 鶴見大学, 歯学部, 講師 (10298268)
• キーワード: 再生医療 / 唾液腺 / iPS細胞

研究概要

発生段階の唾液腺を培養ディッシュ上で３次元的に再現することを目的に、前年度から用いているLCA（large cell-aggregate)-SFEBq法の培養条件の詳細を検討した。具体的には、フィーダー細胞（PH-STO)上で培養することにより未分化状態を維持したマウスのiPS細胞（clone38C2)をトリプシン処理により剥離後、ゼラチンコートディッシュで2日間培養することにより、フィーダー細胞を除去した。その後、iPS細胞（細胞数10,000個ないし15,000個）を0.5nMBMP4非添加ないし添加培地を用いてLCA-SFEBq法により6日間培養を行い、作製された細胞凝集塊の最外層における外胚葉組織（口腔粘膜上皮）形成の有無について解析した。その結果、共焦点レーザー顕微鏡を用いた解析により、凝集塊を作製する細胞数が15,000個、0.5nMBMP4の存在下で、凝集塊の最外層に数層の上皮性マーカーであるカドヘリン陽性細胞の存在が観察され、本条件が外胚葉性組織の誘導に適していることが明らかとなった。次に、前年度までに作製した胎生期唾液腺周囲間質細胞（E11.5およびE13.5)をフィーダーとして、前述した条件で作製したLCAを半割ないし最外層上皮のみを8日間培養した。培養した細胞をトリプシンで分散化し、ゼラチン内で3次元培養を行った。培養1週後に唾液腺組織の分化マーカー発現をRT-PCRにより確認した。その結果、LCA半割ないし上皮の間で、発現程度に差は認められたものの、E13.5のフィーダー上で培養した場合に、唾液腺特異的マーカー（Aqp5,M3AchR，beta2AdR）の発現上昇が認められた。

研究成果

• [雑誌論文] Identification of gene expression profile of neural crest-derived cells isolated from submandibular glands of adult mice. (2014)
  • 著者名/発表者名: Takahashi M, Suzawa T, Yamada A, Yamaguchi T, Mishima K, Osumi N, Maki K, Kamijo R
  • 雑誌名: BBRC 巻: 30 ページ: 1925-1937
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2014.02.130
  • 査読あり
• [雑誌論文] Downregulation of carbonic anhydrase IX promotes Col10a1 expression in chondrocytes. (2013)
  • 著者名/発表者名: Maruyama T, Miyamoto Y, Yamamoto G, Yamada A, Yoshimura K, Suzawa T, Takami M, Akiyama T, Hoshino M, Iwasa F, Ikumi N, Tachikawa T, Mishima K, Baba K, Kamijo R.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 8 ページ: -
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0056984
  • 査読あり
• [雑誌論文] Treatment of salivary gland hypofunction by transplantation with dental pulp cells. (2013)
  • 著者名/発表者名: Yamamura Y, Yamada H, Sakurai T, Ide F, Inoue H, Muramatsu T, Mishima K, Hamada Y, Saito I.
  • 雑誌名: Arch Oral Biol 巻: 58 ページ: 935-942
  • DOI: 10.1016/j.archoralbio.2013.02.015
  • 査読あり
• [雑誌論文] Lin28a is a putative factor in regulating cancer stem cell-like properties in side population cells of oral squamous cell carcinoma. (2013)
  • 著者名/発表者名: Hayashi S, Tanaka J, Okada S, Isobe T, Yamamoto G, Yasuhara R, Irie T, Akiyama C, Kohno Y, Tachikawa T, Mishima K.
  • 雑誌名: Exp Cell Res 巻: 319 ページ: 1220-1228
  • DOI: 10.1016/j.yexcr.2013.03.004
  • 査読あり
• [学会発表] マウス唾液腺細胞におけるCD133陽性細胞の機能解析 (2014)
  • 著者名/発表者名: 田中準一、安原理佳、入江太朗、秋山知恵、河野葉子、美島健二
  • 学会等名: 第13回日本再生医療学会総会
  • 発表場所: 京都国際会議場
  • 年月日: 20140303-20140305
• [備考] 唾液腺再生医療
  • URL: http://www10.showa-u.ac.jp/~oralpath/project.html