汎用性の高い特異的組織・細胞破壊システムを用いた歯形成不全マウスの作製と応用

2013 年度 研究成果報告書

• 研究課題/領域番号: 23592892
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 歯科医用工学・再生歯学
• 研究機関: 鹿児島大学
• 研究代表者: 松本 祐子 鹿児島大学, 医学部・歯学部附属病院, 助教 (20315443)
• 研究分担者: 佐藤 正宏 鹿児島大学, 医用ミニブタ先端開発研究センター, 教授 (30287099) ; 齊藤 一誠 新潟大学, 医歯学総合研究科, 准教授 (90404540) ; 山﨑 要一 鹿児島大学, 医歯学総合研究科, 教授 (30200645) ; 野口 洋文 独立行政法人国立病院機構, 千葉東病院臨床研究センター, 研究員 (50378733) ; 齊藤 陽子 新潟大学, 医歯学総合研究科, 助教 (30404487) ; 稲田 絵美 鹿児島大学, 医学部・歯学部附属病院, 除教 (30448568)
• 研究期間 (年度): 2011 – 2013
• キーワード: 歯形成 / ameloblast / odontoblast / Tgマウス

研究概要

歯形成細胞特異的にDT-A遺伝子を発現するプラスミドの作製として、amelogenin promoterの下流に赤蛍光遺伝子（RFP）とCre遺伝子を繋げた構築体（pARIC）を作成した。作動性を確認するため、pARICとpCETZ-17を生後2週のマウス口蓋部に注入し、in vivo electroporationによる遺伝子導入を行った結果、lacZ遺伝子が発動した。これは、amelogenin promoterによりCre遺伝子が発現し、これがpCETZ-17内のloxPで挟まれたEGFP cDNA + stopperを除去した結果、下流のlacZ遺伝子が発現誘導されたからと思われる。

研究成果

• [雑誌論文] The combinational use of CRISPR/Cas9-based gene editing and targeted toxin technology enables efficient biallelic knockout of theα-1,3-galactosyltransferase gene in porcine embryonic fibroblasts (2014)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Miyoshi K, Nagao Y, Nishi Y, Ohtsuka M, Nakamura S, Sakurai T, Watanabe S
  • 雑誌名: Xenotransplantation 巻: 21 FEB( Article first published online)
  • DOI: 10.1111/xen.12089
  • 査読あり
• [雑誌論文] piggyBac-mediated generation of stable transfectants with surface HLA expression from a small number of cells (2013)
  • 著者名/発表者名: Miura H, Inoko H, Inoue I, Okada Y, Tanaka M, Sato M, Ohtsuka M
  • 雑誌名: Analytical Biochemistry 巻: 437 ページ: 29-31
  • DOI: 10.1016/j.ab.2013.02.003.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Mosaic expression of pluripotency-related proteins oct-3/4 and alkaline phosphatase in human pancreatic carcinoma cell PANC-1 (2013)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Maeda S, Inada E, Saitoh I, Kubota N
  • 雑誌名: Advanced Studies in Biology 巻: 5 ページ: 157-172
  • URL: http://www.doaj.org/doaj?func=issueTOC&isId=150538&uiLanguage=en
  • 査読あり
• [雑誌論文] Hela cells consist of two cell types, as evidenced by cytochemical staining for alkaline phosphatase activity : A possible model for cancer stem cell study (2013)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Kubota N, Inada E, Saitoh I, Ohtsuka M, Nakamura S, Sakurai T, Watanabe S
  • 雑誌名: Advances in Stem Cells 巻: Article ID 208514 ページ: 15
  • DOI: 10.5171/2013.208514
  • 査読あり
• [雑誌論文] Targeted toxin-based selectable drug-free enrichment of mammalian cells with high transgene expression (2013)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Akasaka E, Saitoh I, Ohtsuka M, Nakamura S, Sakurai T, Watanabe S
  • 雑誌名: Biology 巻: 2 ページ: 341-355
  • DOI: 10.3390/biology2010341
  • 査読あり
• [雑誌論文] Improvement of hydrodynamics-based gene transfer of nonviral DNA targeted to murine hepatocytes (2013)
  • 著者名/発表者名: Nakamura S, Maehara T, Watanabe S, Ishihara M, Sato M
  • 雑誌名: BioMed Research International 巻: Article ID 928790 ページ: 9
  • DOI: 10.1155/2013/928790
  • 査読あり
• [雑誌論文] Improvement of pronuclear injection-based targeted transgenesis (PITT) by iCre mRNA-mediated site-specific recombination (2013)
  • 著者名/発表者名: Ohtsuka M, Miura H, Hayashi H, Nakaoka H, Kimura M, Sato M, Gurumurthy CB, Inoko H
  • 雑誌名: Transgenic Research 巻: 22 ページ: 873-875
  • DOI: 10.1007/s11248-013-9703-x
  • 査読あり
• [雑誌論文] Site-targeted non-viral gene delivery by direct DNA injection into the pancreatic parenchyma and subsequent in vivo electroporation in mice (2013)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Inada E, Saitoh I, Ohtsuka M, Nakamura S, Sakurai T, Watanabe S
  • 雑誌名: Biotechnology Journal 巻: 8 ページ: 1355–1361
  • DOI: 10.1002/biot.201300169
  • 査読あり
• [雑誌論文] STO feeder cells are useful for propagation of primarily cultured human deciduous dental pulp cells in view of elimination of contaminated bacteria and promotion of cellular outgrowth (2013)
  • 著者名/発表者名: Murakami T, Saitoh I, Inada E, Kurosawa M, Iwase Y, Noguchi H, Terao Y, Yamasaki Y, Hayasaki H, Sato M
  • 雑誌名: Cell Medicine 巻: 6 ページ: 75-81
  • DOI: 10.3727/215517913X674234
  • 査読あり
• [雑誌論文] Microbial and enzyme technology : an efficient and convenient method for MiniPrep analysis of recombinant plasmids (2013)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Inada E, Saitoh I, Matsumoto Y
  • 雑誌名: Journal of Biomedical Science and Engineering 巻: 7 ページ: 105-107
  • DOI: 10.4236/jbise.2014.73013
  • 査読あり
• [雑誌論文] Culture conditions for mouse pancreatic stem cells (2013)
  • 著者名/発表者名: Noguchi H, Saitoh I, Kataoka H, Watanabe M, Noguchi Y, Fujiwara T
  • 雑誌名: Cell Medicine 巻: 5 ページ: 63-68
  • DOI: 10.3727/215517913X666495
  • 査読あり
• [雑誌論文] Isolation efficiency of mouse pancreatic stem cells is age-dependent (2013)
  • 著者名/発表者名: Takashi K, Noguchi H, Saitoh I, Kataoka H, Watanabe M, Noguchi Y, Fujiwara T
  • 雑誌名: Cell Medicine 巻: 5 ページ: 69-73
  • DOI: 10.3727/215517913X666503
  • 査読あり
• [雑誌論文] Comparison of new preservation solution, HN-1, and University of Wisconsin solution in pancreas preservation for porcine islet isolation (2013)
  • 著者名/発表者名: Akihiro K, Noguchi H, Kuise T, Nakatsuka A, Hirota D, Kataoka H, Kawai T, Inoue K, Imagawa N, Saitoh I, Noguchi Y, Watanabe M, Wada J, Fujiwara T
  • 雑誌名: Cell Medicine 巻: 6 ページ: 3-8
  • DOI: 10.3727/215517913X674171
  • 査読あり
• [雑誌論文] Maintenance of viability and function of rat islets with the use of ROCK inhibitor Y27632 (2013)
  • 著者名/発表者名: Kubota Y, Noguchi H, Seita M, Yuasa T, Sasamoto H, Nakaji S, Okitsu T, Fujiwara T, Kobayashi N
  • 雑誌名: Cell Medicine 巻: 6 ページ: 15-23
  • DOI: 10.3727/215517913X674199
  • 査読あり
• [雑誌論文] Development of Canine Models of Type 1 Diabetes with Partial Pancreatectomy and the Administration of STZ (2013)
  • 著者名/発表者名: Seita M, Noguchi H, Kubota Y, Kawamoto H, Nakaji S, Kobayashi N, Fujiwara T
  • 雑誌名: Cell Medicine 巻: 6 ページ: 25-31
  • DOI: 10.3727/215517913X674289
  • 査読あり
• [雑誌論文] Development of a technique for efficient gene transfer to antral follicular cells in the mouse ovary (2012)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Akasaka E, Saitoh I, Ohtsuka M, Watanabe S
  • 雑誌名: Systems Biology in Reproductive Medicine 巻: 58 ページ: 136-141
  • DOI: 10.3109/19396368.2012.656796.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Targeted transgenesis through pronuclear injection of improved vectors into in vitro fertilized eggs (2012)
  • 著者名/発表者名: Ohtsuka M, Miura H, Nakaoka H, Kimura M, Sato M, Inoko H
  • 雑誌名: Transgenic Research 巻: 21 ページ: 225-226
  • DOI: 10.1007/s11248-011-9505-y.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Expression analysis of aα-1, 3-galactosyltransferase, an enzyme that creates xenotransplantation-relatedα-Gal epitope, in pig preimplantation embryos (2012)
  • 著者名/発表者名: Chi H, Sato M, Yoshida M, Miyoshi K
  • 雑誌名: Animal Science Journal 巻: 83 ページ: 88-93
  • DOI: 10.1111/j.1740-0929.2011.00964.x.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Successful suppression of endogenousα-1,3-galactosyltransferase expression by RNA interference in pig embryos generated in vitro (2012)
  • 著者名/発表者名: Chi H., Shinohara M., Yokomine T., Sato M., Takao S., Yoshida M., Miyoshi K
  • 雑誌名: Journal of Reproduction and Development 巻: 58 ページ: 69-76
  • DOI: 10.1262/jrd.10-165M
  • 査読あり
• [雑誌論文] In vivo gene transfer in mouse preimplantation embryos after intraoviductal injection of plasmid DNA and subsequent in vivo electroporation (2012)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Akasaka E, Saitoh I, Ohtsuka M, Watanabe S
  • 雑誌名: Systems Biology in Reproductive Medicine 巻: 58(Posted online on) ページ: 278-287
  • DOI: 10.3109/19396368.2012.688088.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Determination of the optimal concentration of several selective drugs useful for generating multi-transgenic porcine embryonic fibroblasts (2012)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Ohtsuka M, Miura H, Miyoshi K, Watanabe S
  • 雑誌名: Reproduction in Domestic Animals 巻: 47 ページ: 759-765
  • DOI: 10.1111/j.1439-0531.2011.01964.x
  • 査読あり
• [雑誌論文] A Cre knock-in mouse line on the Sickle tail locus induces recombination in the notochord and intervertebral disks (2012)
  • 著者名/発表者名: Abe K, Araki K, Tanigawa M, Semba K, Ando T, Sato M, Sakai D, Hiyama A, Mochida J, Yamamura K-I
  • 雑誌名: Genesis 巻: 50(Article first published online) ページ: 758-765
  • DOI: 10.1002/dvg.22035
  • 査読あり
• [雑誌論文] CD81 and CD9 work independently as extracellular components upon fusion of sperm and oocyte (2012)
  • 著者名/発表者名: Ohnami N, Nakamura A, Miyado M, Sato M, Kawano N, Yoshida K, Harada Y, Takezawa Y, Kanai S, Ono C, Takahashi Y, Kimura K, Shida T, Miyado K, Umezawa A
  • 雑誌名: Biology Open 巻: 1( Advance Online Publication) ページ: 640-647
  • DOI: 10.1242/bio.20121420
  • 査読あり
• [雑誌論文] A simplified protocol for the semi-large scale recovery of plasmids from Escherichia coli grown on agar plates (2012)
  • 著者名/発表者名: Sato M, Akasaka E, Saitoh I, Ohtsuka M, Nakamura S, Sakurai T, Watanabe S
  • 雑誌名: Journal of Biomedical Science and Engineering 巻: 5 ページ: 406-408
  • DOI: 10.4236/jbise.2012.57051.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Generation of a set of mouse STO feeder cell lines that confer resistance to several types of selective drugs (2012)
  • 著者名/発表者名: Saitoh I, Sato M, Iwase Y, Akasaka E, Yamasaki Y, Noguchi H
  • 雑誌名: Cell Medicine 巻: 3(1) ページ: 97-102
  • DOI: 10.3727/215517912X639414
  • 査読あり
• [雑誌論文] PITT : Pronuclear injection-based targeted transgenesis, a reliable transgene expression method in mice (2012)
  • 著者名/発表者名: Ohtsuka M, Miura H, Sato M, Kimura M, Inoko H, Gurumurthy CB
  • 雑誌名: Experimental animals 巻: 61 ページ: 489-502
  • DOI: 10.1538/expanim.61.489
  • 査読あり
• [雑誌論文] Fluorescent transgenic mice suitable for multi-color aggregation chimera studies (2012)
  • 著者名/発表者名: Ohtsuka M, Miura H, Gurumurthy CB, Kimura M, Inoko H, Yoshimura S, Sato M
  • 雑誌名: Cell and Tissue Research 巻: 350 ページ: 251-260
  • DOI: 10.1007/s00441-012-1470-0.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Attenuation of limb loss in an experimentally induced hindlimb ischemic model by FGF-2/ F/P MPs as a delivery system (2012)
  • 著者名/発表者名: Nakamura N, Ishihara M, Takikawa M, Kishimoto S, Isoda S, Fujita M, Sato M, Maehara T
  • 雑誌名: Tissue Engineering Part A 巻: 18 ページ: 2239-2247
  • DOI: 10.1089/ten.TEA.2011.0741.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Delivery system for autologous growth factors fabricated with low-molecular-weight heparin and protamine to attenuate ischemic hindlimb loss (2012)
  • 著者名/発表者名: Nakamura S, Takikawa M, Ishihara M, Nakayama T, Kishimoto S, Isoda S, Ozeki Y, Sato M, Maehara T
  • 雑誌名: Journal of Artificial Organs 巻: 15 ページ: 375-385
  • DOI: 10.1007/s10047-012-0658-0.
  • 査読あり
• [雑誌論文] Liver lobe- and strain-difference in gene expression after hydrodynamics-based gene delivery in mice
  • 著者名/発表者名: Nakamura S, Maehara T, Ishihara M, Sato M
  • 雑誌名: Animal Biotechnology 巻: (in press)
  • 査読あり
• [学会発表] Multipotency of juvenile human buccal epithelial cells (2014)
  • 著者名/発表者名: Murakami T, Saitoh I, Iwase Y, Inada E, Mastuyama J, Ohshima H, Hayasaki H, Sato M
  • 学会等名: AADR
  • 発表場所: North Carolina
  • 年月日: 20140300
• [学会発表] gcr2タンパクは糖鎖を介してI型BMP受容体と結合しシグナル伝達制御に関与する (2013)
  • 著者名/発表者名: 渡部聡、梶原景正、麥倉真一郎、桜井敬之、中村伸吾、木村穣、佐藤正宏
  • 学会等名: 第36回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 20131200
• [学会発表] RISPR/Cas9による遺伝子編集と標的毒素法との組み合わせは、α-1,3-galactosyltransferase遺伝子を完全にKOしたブタ胎仔性線維芽細胞の効率的作製に有効である (2013)
  • 著者名/発表者名: 佐藤正宏、三好和睦、長尾洋三、西洋平、大塚正人、中村伸吾、桜井敬之、渡部聡
  • 学会等名: 第36回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 20131200
• [学会発表] Syngenic grafting of a whole male juvenile gonadal tissue into the adult testes confers successful spermatogenesis in mice (2013)
  • 著者名/発表者名: Tada N, Kanai F, Nakamura E, Lu H, Saito M, Sato M
  • 学会等名: The 3rd World Congress of the International Society for Fertility Preservation
  • 発表場所: Malia Valencia Hotel, Valencia, Spain
  • 年月日: 20131107-09
• [学会発表] トランスポゾンPiggyBacシステムによる複数遺伝子のブタ細胞への同時導入 (2013)
  • 著者名/発表者名: 郡山美優, 稲田絵美, 齋藤一誠, 三浦浩美, 大塚正人, 中村伸吾, 桜井敬之, 渡部聡, 三好和睦, 佐藤正宏
  • 学会等名: 第106回日本繁殖生物学会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 20130900
• [学会発表] ヒト乳歯歯髄由来iPS細胞樹立におけるフィーダー細胞選択の重要性 (2013)
  • 著者名/発表者名: 村上智哉, 齊藤一誠, 稲田絵美, 岩瀬陽子, 長谷川大子, 窪田直子, 松本祐子, 大島邦子,岡暁子, 山崎要一, 早崎治明
  • 学会等名: 第51回日本小児歯科学会
  • 発表場所: 岐阜
  • 年月日: 20130500
• [学会発表] 受精卵へのiCre mRNA注入によるターゲットトランスジェネシス法(PITT法)の効率改善 (2013)
  • 著者名/発表者名: 大塚正人、三浦浩美、佐藤正宏、木村穣
  • 学会等名: 第60回日本実験動物学会総会
  • 発表場所: 茨城
  • 年月日: 20130500
• [学会発表] 初代ヒト乳歯歯髄細胞における幹細胞特異的遺伝子発現の探索 (2012)
  • 著者名/発表者名: 乃村俊樹, 齊藤一誠, 稲田絵美, 長谷川大子, 松本祐子, 窪田直子, 山﨑要一
  • 学会等名: 第30回日本小児歯科学会九州地方会大会
  • 発表場所: 長崎
  • 年月日: 20121100